Diccionario

Matriz de poliacrilamida empleada comúnmente para electroforesis en gel. Muy útil para caracterizar mezclas complejas de proteínas y para el estudio de ácidos nucleicos. Su poder de definición es muy bueno pudiendo localizar microgramos de proteína. Una ventaja de estos geles es que son químicamente inertes, transparentes y estables en una amplia gama de pH, temperatura y fuerza iónica.

Procedimiento electroforético en el cual se utiliza la poliacrilamida como matriz de soporte para separar proteínas de acuerdo con la longitud de la cadena peptídica. Puede ser unidimensional utilizando tanto proteínas nativas (no desnaturalizadas) como proteínas solubilizadas (desnaturalizadas) con dodecil sulfato sódico (sodium dodecyl sulfate, SDS). La de tipo bidimensional, separa la proteína nativa en la primera dimensión. A continuación, la placa se trata con SDS y la muestra se separa en la segunda dimensión, en la que en realidad se separan las subunidades individuales de cada proteína. También se utiliza para el diagnóstico de viroides. Se basa en la separación diferencial de moléculas de ARN de las diferentes especies de viroides en función de su tamaño, lo que permite detectarlos e identificarlos. Como parte del diagnóstico de viroides se usa también el sistema de doble electroforesis secuencial en geles de poliacrilamida, que consiste en el uso de un primer gel nativo y un segundo gel en condiciones desnaturalizantes.

Acrónimo del inglés. En español, electroforesis en gel de poliacrilamida.

Denominación común de la técnica analítica utilizada para identificar proteínas específicas en una mezcla compleja de proteínas, como la que se presenta en extractos celulares o de tejidos vegetales. La técnica tiene tres etapas: i) separación por tamaño generalmente en un gel de poliacrilamida; ii) transferencia por difusión simple, por vacío o electroforesis a un soporte sólido (membrana de nitrocelulosa, éster de celulosa, o generalmente fluoruro de polivinilideno o PVDF) y, finalmente; iii) visualización colorimétrica mediante ELISA directo o indirecto, con el uso de anticuerpos específicos marcados usualmente con fosfatasa alcalina, o anticuerpos específicos y antiespecie conjugados y un sustrato apropiado. También se puede realizar el revelado mediante quimioluminiscencia, fluorescencia, o radiactividad. Se han diseñado aparatos que permiten la electrotransferencia simultánea a varias membranas, con objeto de revelar las distintas copias con diferentes anticuerpos específicos. Están disponibles comercialmente membranas de nitrocelulosa o fluoruro de polivinilideno, polifluoruro de vinilideno o polivinilideno fluoruro (PVDF) precortadas, compatibles con la mayoría de aparatos de electrotransferencia.

Compuesto orgánico de tipo amida, blanca, inodora y cristalina, soluble en agua, etanol, éter y cloroformo. Se utiliza su homopolímero (poliacrilamida) en forma de gel para la separación de proteínas mediante electroforesis o para diagnóstico e identificación de viroides en función de su tamaño. Su polímero no es tóxico, sin embargo, la acrilamida que no ha polimerizado es neurotóxica, de ahí que los geles deban ser manipulados con precaución pues pueden contener bajas cantidades de acrilamida no polimerizada. Se forma acrilamida en alimentos durante la cocción, fritura o asado y durante los procesos industriales a 120 oC y a baja humedad, y también es un componente del humo del tabaco. Los resultados de exposición realizados en humanos proporcionan pruebas limitadas en cuanto a su asociación con el desarrollo de cáncer de distintos órganos, e irregularidades en el sistema nervioso.

Aquella que utiliza agentes desnaturalizantes de proteínas, para hacer que pierdan su estructura tridimensional. Generalmente se utilizan agentes físicos (calor) o químicos como los detergentes (por ejemplo, dodecil sulfato sódico, sodium dodecyl sulfate, sigla SDS), caótropos (por ejemplo, urea) o agentes reductores (2-mercaptoetanol, ditiotreitol-DTT, entre otros) o cambios de pH o fuerza iónica. Para la visualización de las proteínas se utilizan diferentes métodos de tinción, siendo el más habitual el azul de coomassie. En la SDS-PAGE, la separación es función del tamaño (masa molecular), lo que permite determinar el peso molecular de las proteínas. Para ello se compara la movilidad electroforética de la proteína de peso molecular desconocido (problema) con el de proteínas de referencia de peso molecular conocido.