Diccionario

1. Aquella en la cual una de las especies que se hibridan se acompleja sobre un soporte insoluble. 2. En el análisis global de la expresión, se utiliza frecuentemente la modalidad de hibridación de ácidos nucleicos fijados sobre un soporte sólido con ADNc sintetizado a partir de ARNm de la muestra a analizar (hibridación de matrices de ácidos nucleicos). Los formatos más empleados utilizan como soporte membranas de nailon (macromatrices) o cristales tipo portaobjetos empleados en microscopía óptica (micromatrices).

Denominación común de la hibridación de ácidos nucleicos (ADN o ARN), que en el campo de la Patología Vegetal se aplica con frecuencia a la detección e identificación de patógenos de vegetales. Su potencial como herramienta de diagnóstico se demostró primero para la detección de viroides y posteriormente para virus. Asociación de dos cadenas de ácidos nucleicos complementarias para formar una cadena doble que contenga dos cadenas de ADN, dos cadenas de ARN o una de ADN y una de ARN. Se emplea para detectar secuencias específicas de ADN o ARN. Se basa en la interacción específica entre las bases púricas y pirimidínicas complementarias que forman pares A-T y G-C, lo que resulta en un híbrido estable formado por parte, o la totalidad, de la secuencia del ácido nucleico del patógeno a detectar (molécula diana) y en la secuencia complementaria marcada (sonda). La estabilidad del híbrido depende del número de enlaces de hidrógeno formado y de las fuerzas electrostáticas e hidrófobas. Las fuerzas electrostáticas son debidas a las moléculas de fosfato del esqueleto del ácido nucleico, mientras que las interacciones hidrofóbicas se mantienen entre las bases apiladas. La detección de agentes fitopatógenos, como los virus, se realiza mediante la unión del ácido nucleico del genoma viral con moléculas de ácido nucleico complementario (sonda), que han sido marcadas con un isótopo radiactivo u otra molécula no radiactiva, como la biotina, avidina, proteína A, digoxigenina, proteína verde fluorescente-GFP, etc., que permite detectar, localizar, incluso valorar de forma cuantitativa, la hibridación ocurrida. Los principales factores que afectan a la reacción de hibridación son: la longitud y la composición de bases de la sonda, la temperatura, la concentración de sales, el pH, la concentración de formamida y el grado de identidad entre muestra y sonda. Las técnicas más usadas son: hibridación en fase sólida, Southern blot, Northern blot, hibridación dot-blot, hibridación con polisondas e hibridación in situ.

Técnica analítica y de detección en la que una sonda de ADN o ARN marcada radiactivamente se hibrida con material celular fijado. Una autorradiografía de la preparación revela la localización precisa de las secuencias de ADN implicadas en la hibridación. En el ámbito de la Patología Vegetal, se utiliza fundamentalmente para localizar genes o secuencias de agentes patógenos en cromosomas, células y tejidos fijados.