Diccionario

Conjunto de técnicas serológicas que combinan la especificidad de los anticuerpos con el alto poder de resolución de la microscopía electrónica. La reacción antígeno-anticuerpo puede ser visualizada y localizada a nivel celular o intercelular, utilizando anticuerpos marcados con oro coloidal u otro material denso a los electrones (decoración). También se utilizan para capturar antígenos específicos sobre rejillas de microscopía electrónica previamente sensibilizadas con anticuerpos, confiriendo gran sensibilidad y especificidad a las observaciones mediante microscopía electrónica (captura o inmunocaptura).

Inmovilización de agentes patógenos o de parte de sus constituyentes o metabolitos de forma específica o no, con fines de detección o identificación. Se realiza normalmente en el mismo soporte sólido en el que se realiza la reacción inmunológica, de hibridación o de amplificación molecular. Frecuentemente se efectúa por medio de anticuerpos específicos en el caso de inmunoelectromicroscopía.

Sistema muy utilizado en biología como marcador en numerosos métodos de detección de proteínas y ácidos nucleicos. La unión no covalente biotina-avidina es muy estable. La constante de afinidad del complejo biotina-avidina es de 1015 M-1, una de las más altas conocidas (como referencia, la afinidad entre antígeno y anticuerpo suele ser de alrededor de 1012 M-1). La estreptavidina es la proteína marcadora de uso más habitual ya que es no glicosilada y muestra niveles bajos de unión inespecífica y ha sustituido a la avidina que es una glicoproteína altamente catiónica y puede producir coloración de fondo inespecífica en algunas aplicaciones, debido a sus residuos cargados positivamente y componentes de oligosacáridos. El sistema es muy utilizado y hace posible que el uso de moléculas (frecuentemente anticuerpos) o compuestos biotinilados sean revelados con estreptavidina marcada o conjugada con enzimas, oro coloidal, hierro, fluorocromos, etc. o cualquier sustancia o elemento delator. El sistema es utilizado en técnicas ELISA, citometría de flujo, inmunotransferencia, inmunohistoquímica, inmunoelectromicroscopía de decoración, adquisición de imágenes fluorescentes, sondas de ADN para hibridación Southern o in situ, o detección en general. También se usan resinas y gránulos magnéticos de estreptavidina conjugada para aislar proteínas, células y ADN, o en separación biológica.

Técnica serológica de microscopía electrónica en la que la muestra es incubada primero con anticuerpos específicos del agente patógeno (muestra) marcados con una sustancia densa a los electrones (como oro coloidal o hierro), o con anticuerpos específicos (producidos en una especie animal determinada) y posteriormente con inmunoglobulinas anti o contra la especie primera, conjugadas con oro coloidal, antes de su observación. La imagen del objeto en estudio aparecerá recubierta (decorada) con los anticuerpos que hayan reconocido específicamente a los epítopos contenidos en la muestra estudiada, facilitando su localización en los tejidos vegetales o del vector, y su detección e identificación específica.

1. Uso de anticuerpos específicos para sensibilizar o tapizar tubos en la reacción en cadena de la polimerasa (PCR o RT-PCR) con el fin de enriquecer en los patógenos de interés aquellos presentes en el extracto bruto de la muestra, en una fase previa a su detección. Requiere la obtención de extractos, pero evita la purificación de ácidos nucleicos de la muestra. Consiste en varias etapas: i) concentración de viriones o de células de cualquier otro patógeno presentes en el extracto vegetal por captura en las paredes de los tubos de PCR tapizados con anticuerpos específicos; ii) eliminación por sucesivos lavados de los restos del extracto vegetal e inhibidores no inmunocapturados; iii) realización de la reacción de amplificación en el mismo tubo. Los ácidos nucleicos del patógeno a detectar son liberados por el calor de la reacción. El método mejora la sensibilidad de la PCR o RT-PCR simple convencional, además de reducir inhibidores de los extractos vegetales y constituye un método sencillo y económico de preparación de muestras para amplificación, aunque su sensibilidad y sencillez ha sido muy superada por otras versiones de PCR. 2. (trapping). Tapizado o sensibilización con anticuerpos específicos de rejillas de microscopía electrónica con el fin de atrapar selectivamente partículas virales, células bacterianas o fúngicas presentes en la muestra depositada en la rejilla.