Diccionario

Técnica serológica de localización de antígenos en secciones de tejido inmovilizadas o impresas en membranas de nitrocelulosa, éster de celulosa o papel. Las secciones de tejido de material vegetal recién cortado se impresionan contra la membrana suave pero firmemente, de manera que se permita la observación de la estructura de la sección. Las huellas o improntas de tejido inmovilizadas se revelan como en una técnica ELISA, frecuentemente directa, con el uso de anticuerpos específicos conjugados con la enzima fosfatasa alcalina. El revelado se realiza con substrato precipitante azul nitrotetrazolio (o cloruro de tetrazolio nitroazul) y 5-bromo-4-cloro indolil fosfato (NBT+BCIP). La presencia de acúmulos de precipitado violeta en la zona vascular indica infección para patógenos vasculares y acúmulos en otras zonas indican la presencia localizada de otros patógenos extracelulares, en función de los anticuerpos utilizados. Es extensivamente empleada en viveros y prospecciones para la detección rutinaria de Closterovirus tristezae (Citrus tristeza virus-CTV), pues es la técnica serológica de referencia usada con anticuerpos monoclonales específicos. La realización de la prueba es sencilla, no requiere de personal especializado para su ejecución que puede efectuarse en condiciones de campo de forma muy económica.

Enzima que cataliza la hidrólisis de ésteres de fosfato. Se utiliza para diversos protocolos experimentales, que incluyen, entre otros, la eliminación de grupos fosfatos de moléculas de ADN (para evitar la religación de vectores en un experimento de clonación, por ejemplo) y técnicas inmunológicas. La enzima procedente de la mucosa intestinal de ternera es la más utilizada en la técnica ELISA en Fitopatología y en inmunodetección en general, para marcar anticuerpos y proteína A. Su sustrato soluble es el p-nitrofenil fosfato en dietanolamina a pH 9,8. Su hidrólisis produce una coloración amarilla muy intensa en disolución alcalina, cuantificable espectrofotométricamente a 405 nm. Si se utiliza un sustrato cromogénico precipitante de cloruro de nitroblue tetrazolio (nitroazul de tetrazolio) o NBT con 5-bromo 4-cloro 3-indolil fosfato (BCIP), produce precipitados color azul oscuro a púrpura. Es muy utilizado para localización de patógenos (especialmente de virus) por inmunodetección (inmunohistoquímica e inmunoimpresión-ELISA) y en inmunoelectrotransferencia. Ambos sustratos están disponibles comercialmente en forma de pastillas para su disolución en agua.

Vocablo inglés, también utilizado comúnmente en español. Se refiere al conjunto de procedimientos o pruebas biológicas con una serie o gama de plantas indicadoras, normalmente leñosas inoculadas por injerto, para detectar la presencia de agentes patógenos transmisibles por injerto del material vegetal analizado (algunas bacterias, entre ellas todos los fitoplasmas, micoplasmas entre ellos los espiroplasmas, algunos hongos y oomicetos, virus y viroides). El término también incluye a las pruebas biológicas con una serie de plantas indicadoras herbáceas inoculadas mecánicamente. El procedimiento general consiste en tomar material de una planta problema a analizar y transferirlo por injerto o inoculación mecánica a otra planta (denominada indicadora) que desarrollará, tras un período de tiempo variable, síntomas más o menos característicos del patógeno buscado, caso de estar presente. Normalmente, las plantas inoculadas son mantenidas en las condiciones más apropiadas para la expresión de la infección. La manifestación de síntomas sucede en días en el caso de plantas indicadoras herbáceas, pero en los indicadores leñosos transcurren generalmente meses. El método es muy sensible pues permite la multiplicación del patógeno inoculado por injerto en la planta indicadora hasta provocar síntomas. Se ha realizado extensivamente durante décadas para selección sanitaria en la práctica totalidad de cultivos leñosos y algunos herbáceos como la fresa, antes de la aplicación de otras tecnologías como las serológicas ELISA, la hibridación o la amplificación molecular por PCR en tiempo real o la secuenciación masiva. Posibilita la detección de agentes patógenos transmisibles por injerto, aún de los de etiología desconocida, razón por la que se continúa utilizando en algunos casos específicos y países. Actualmente es habitual simultanear pruebas sensibles y específicas de laboratorio (por ejemplo, se usa la inmunoimpresión-ELISA con anticuerpos monoclonales o RT-PCR en tiempo real, para detección fiable del virus de la tristeza de los cítricos, Closterovirus tristezae o Citrus tristeza virus-CTV, sustituyendo a la clásica planta indicadora de lima mexicana). Así, se logra reducir el uso de plantas indicadoras que resulta lento, caro, no suficientemente específico y precisa personal especializado para la lectura de síntomas y espacio de invernadero o cámara climática para la realización de las pruebas. No obstante, constituye una prueba definitiva, y frecuentemente única, para demostrar la patogenicidad y valorar la agresividad de un agente patógeno en distintos huéspedes o anfitriones. 2. En ocasiones, se utiliza el término para referirse de modo amplio a una serie de pruebas, no solamente de inoculación en plantas indicadoras, para conocer el estado sanitario de una planta o sus productos (bulbos, semillas, tubérculos, etc.) a modo de cribado.

Huella de secciones de material vegetal inmovilizado en membranas para su revelado inmunológico, generalmente por inmunoimpresión.

Derivado de nitrato de la celulosa utilizado como polvo o convertido en filtros de membrana de porosidad definida. Se utiliza para fijar ácidos nucleicos en procedimientos de transferencia Northern y Southern y de proteínas en transferencia Western e inmunoimpresión. Actualmente es reemplazada por membranas de ésteres mezclados de nitrocelulosa, ya que la nitrocelulosa pura seca es explosiva y puede encenderse o explotar por calor, chispas o fricción.

Polirribonucleótido bicatenario. Se ha usado como antígeno para la producción de anticuerpos capaces de reconocer ARN mediante técnicas serológicas ELISA, de inmunoimpresión u otras, especialmente en material vegetal inmovilizado o fijado.

Sigla del inglés.

Denominación común en español, que proviene del acrónimo del inglés “Enzyme-Linked Immunosorbent Assay”, o ensayo inmunoenzimático en fase sólida o ensayo por inmunoadsorción ligado a enzimas, popularmente ELISA. Da nombre a una técnica inmunológica o ensayo inmunoenzimático o serológico muy sensible para detectar, cuantificar, identificar o comparar antígenos complejos (agentes patógenos), proteínas, anticuerpos, péptidos u hormonas, incluso en extractos vegetales brutos. Esta prueba se caracteriza por utilizar un soporte insoluble o inmunoadsorbente (microplacas, tubos, pocillos o membranas) para fijar, tapizar o sensibilizar con antígenos o anticuerpos, según la modalidad de técnica. La prueba consiste en una serie de incubaciones mediadas por lavados, hasta adicionar el substrato. Se caracteriza porque la reacción se revela con anticuerpos conjugados enzimáticamente (frecuentemente en Patología vegetal con fosfatasa alcalina de mucosa intestinal de ternera y en ocasiones con peroxidasa de rábano picante) o biotinilados y un sustrato apropiado a la enzima marcadora (p-nitrofenil fosfato en el caso de la fosfatasa alcalina y peróxido de hidrógeno para la peroxidasa). La densidad óptica o valor ELISA final es proporcional a la cantidad de antígeno o anticuerpo detectado y permite asignar un valor numérico a la detección semicuantitativa. Se han diseñado distintas variantes o modalidades: ELISA directo, indirecto, de doble sándwich de anticuerpos (DAS), indirecto doble sándwich de anticuerpos (DASI), y competición. Las modalidades pueden realizarse con anticuerpos policlonales, con anticuerpos monoclonales, con anticuerpos recombinantes o con fragmentos F(ab´)2 de anticuerpo y proteína A conjugada. La técnica ELISA puede realizarse con sustratos solubles o precipitantes.