Diccionario

Técnica utilizada para generar mutaciones puntuales, inserciones o deleciones en una cadena de ADN. La generación de mutaciones puntuales requiere sintetizar un fragmento corto de ADN, el cebador, que contenga la mutación. El cebador debe hibridar con la molécula simple, unicatenaria, de ADN que contenga el gen de interés. Mediante una ADN polimerasa, se elonga la cadena (el fragmento unicatenario más el cebador) incorporando la mutación al ADN y formando una molécula de ADN completa bicatenaria. Dicha doble cadena de ADN puede ser introducida en una célula huésped y clonarla, tras lo que se pueden escoger los mutantes de interés. Para la generación de inserciones y deleciones, a menudo se utilizan fragmentos de DNA clonado que se intercambian con el genoma mediante un proceso de intercambio de marcadores (marker-exchange) o que simplemente se integran (Campbell integration), generando la mutación. Existen muchas otras metodologías para la generación de mutaciones dirigidas, tanto en procariotas como en eucariotas; un ejemplo de mutagénesis dirigida en eucariotas de amplia utilización es la tecnología CRISPR-Cas.