Diccionario

Técnica utilizada para generar mutaciones puntuales, inserciones o deleciones en una cadena de ADN. La generación de mutaciones puntuales requiere sintetizar un fragmento corto de ADN, el cebador, que contenga la mutación. El cebador debe hibridar con la molécula simple, unicatenaria, de ADN que contenga el gen de interés. Mediante una ADN polimerasa, se elonga la cadena (el fragmento unicatenario más el cebador) incorporando la mutación al ADN y formando una molécula de ADN completa bicatenaria. Dicha doble cadena de ADN puede ser introducida en una célula huésped y clonarla, tras lo que se pueden escoger los mutantes de interés. Para la generación de inserciones y deleciones, a menudo se utilizan fragmentos de DNA clonado que se intercambian con el genoma mediante un proceso de intercambio de marcadores (marker-exchange) o que simplemente se integran (Campbell integration), generando la mutación. Existen muchas otras metodologías para la generación de mutaciones dirigidas, tanto en procariotas como en eucariotas; un ejemplo de mutagénesis dirigida en eucariotas de amplia utilización es la tecnología CRISPR-Cas.

Término que incluye técnicas de edición génica que no impliquen transgenia, para desarrollar nuevas variedades o mejorar las existentes con el fin de lograr mayor tolerancia o resistencia frente a estreses abióticos o plagas en sentido amplio. Se creó un grupo de trabajo de expertos de la Comisión Europea (CE) en nuevas tecnologías genómicas para evaluar si las nuevas técnicas aplicadas a la fitogenética o a la modificación de otros organismos constituyen una modificación genética, y para valorar si los organismos resultantes entran dentro del ámbito de la normativa europea sobre organismos modificados genéticamente (OMG). El grupo identificó nueve técnicas nuevas: la nucleasa de dedo de zinc (zinc-finger nucleases, ZFN), la mutagenesis dirigida por oligonucleótidos (oligo-directed mutagenesis, ODM), la metilación de ADN dependiente de ARN, el injerto con patrón modificado genéticamente, la agroinfiltración, la genética inversa, la genómica sintética, la intragénesis y la cisgénesis. Este grupo de trabajo ha propuesto que los vegetales generados por mutagénesis dirigida y cisgénesis se consideren diferentes de las plantas transgénicas, lo que deberá ser aprobado por el Parlamento Europeo. En el ámbito de la Sanidad Vegetal, supondría la aceptación de las técnicas de edición genética, como CRISPR/Cas9, que se está aplicando para editar y modificar genes de susceptibilidad y controlar la infección, o para conferir una mayor tolerancia al frío, la sequía, la salinidad u otros estreses abióticos. Los primeros productos así obtenidos están en el mercado de los países donde no se requiere una aprobación regulatoria para su cultivo.

Aquel de especies procarióticas que no es portador de secuencias que determinen la replicación autónoma del ADN en la célula transformada. Al no poder replicarse no puede ser transmitido a las células hijas y, por tanto, se pierde por dilución, de ahí que se le denomine suicida. Esta propiedad es aprovechada para la expresión transitoria de genes en la célula receptora (por ejemplo, de una transposasa para realizar una mutagénesis), o para forzar la selección de clones en los que el vector se haya integrado en el genoma de la célula transformada (por ejemplo, mediante el ADN clonado en el vector suicida y que permite realizar una mutagénesis dirigida). Es el más sencillo, generalmente lleva el ADN de un replicón que le permite replicarse en la célula donante y un gen que le confiere resistencia a algún antibiótico para su selección en cultivo.