Diccionario

Subunidad estructural de ácidos nucleicos. Compuesto que consta de una base nitrogenada unida covalentemente a un azúcar pentosa. En los nucleósidos biológicamente más importantes, el azúcar puede ser ribosa (ribonucleósidos) o desoxirribosa (desoxirribonucleósidos), y el compuesto que contiene nitrógeno es una pirimidina (citosina, timina o uracilo) o una purina (adenina o guanina). El nucleósido es el precursor del nucleótido, pues puede combinarse con uno o más grupos fosfórico mediante quinasas especiales de la célula, produciendo nucleótidos, que son los componentes moleculares básicos del ADN y el ARN Los nucleósidos trifosfato que contienen ribosa como azúcar se abrevian convencionalmente como NTP (son los componentes básicos del ARN, mensajeros químicos o moléculas de transferencia de energía, como el ATP), mientras que los nucleósidos trifosfatos que contienen desoxirribosa como azúcar se abrevian como dNTP (son los componentes básicos del ADN).

Tecnología reciente para la preparación de sondas de hibridación de ADN activadas por fluorescencia dirigidas a secuencias de ARNm específicas. Se basa en la conjugación de un intercalador no fluorescente en la base de un ácido nucleico (como uracilo) a través de un espaciador flexible. Este monómero modificado se puede incorporar a los oligonucleótidos mediante síntesis en fase sólida. Se observa una gran mejoría de la fluorescencia cuando el nucleótido modificado se hibrida con su cadena complementaria debido a la intercalación del fluoróforo entre las dos cadenas.

Base púrica o pirimidínica que presenta una estructura ligeramente distinta de la de una base convencional, de modo que cuando ocupa el lugar de esta última, en el momento en que se sintetiza una hebra de ácido nucleico, puede dar lugar a mutaciones por transición o transversión. Algunos análogos pueden inhibir la síntesis de nucleótidos de purinas o pirimidinas, o la replicación del ADN. Son ejemplos de análogos de base la aminopurina, la azaguanina, el 5-bromouracilo y la mercaptopurina. Los análogos de nucleósidos se comportan de manera parecida.

Reacción química de purina desoxirribonucleósidos, desoxiadenosina y desoxiguanosina, y ribonucleósidos, adenosina o guanosina, en la que el enlace β-N-glucosídico se escinde hidrolíticamente liberando una base nucleica, adenina o guanina, respectivamente. Básicamente consiste en la eliminación del enlace N-glucosídico entre la base nitrogenada y el azúcar, con la consiguiente pérdida de un residuo de adenina o guanina. El proceso se efectúa en transferencias Southern para facilitar la transferencia de fragmentos largos.

Sigla de nucleósidos trifosfato. Que contienen desoxirribosa como azúcar y son componentes básicos del ADN.

Nucleósido trifosfato de inosina.

Enzima que cataliza la condensación de dos moléculas, acoplada a la rotura de un nucleósido trifosfato (ATP, GTP, UTP, etc.). Es uno de los grupos principales utilizados en la clasificación de las enzimas, en: i) formadoras de enlaces C-O; ii) formadoras de enlaces C-S; iii) formadoras de enlaces C-N; y iv) formadoras de enlaces C-C.

Sigla de nucleósidos trifosfatos, que contienen ribosa como azúcar. Son componentes básicos del ARN.

Sigla del inglés. En español, reacción en cadena de la polimerasa. Se sugiere el uso de la sigla PCR en español, en vez de RCP que le correspondería, para evitar la confusión con el uso extendido de la sigla del término “reanimación cardiopulmonar”. Se trata de una técnica de amplificación molecular desarrollada para producir múltiples copias sintéticas de una secuencia de ADN, o diana, al realizar varios ciclos sucesivos, de tres etapas secuenciales: i) desnaturalización del ADN diana a >90 °C; ii) hibridación de los cebadores o iniciadores a 40-65 °C; y iii) extensión a 72 °C. En cada ciclo se consigue, en poco tiempo, duplicar el número de copias de ADN de modo que se logra un aumento exponencial del número de copias del fragmento o amplicón. En la denominada PCR convencional, los fragmentos amplificados se separan mediante electroforesis en un gel de agarosa y se visualizan mediante métodos colorimétricos o basados en tinción con bromuro de etidio, GelRed u otros fluorocromos. También se pueden detectar los amplicones mediante hibridación en membrana, ELISA en microplaca y otros métodos, y su tamaño se calcula por comparación con fragmentos de ADN de tamaño conocido. Es utilizada frecuentemente para detectar e identificar organismos fitopatógenos, basada en la amplificación de un fragmento del material genético del patógeno. Se utiliza una pareja de iniciadores, o más, y su eficiencia se basa en la especificidad de los cebadores, tipo de polimerasa empleada, composición y estabilidad del tampón, pureza y concentración de la mezcla de nucleósidos trifosfatos (dNTPs), parámetros de la amplificación (temperatura de hibridación de los cebadores, concentración de MgCl2, etc.), así como en las características de la propia muestra. Su mayor inconveniente para la detección y diagnóstico reside en el alto riesgo de contaminaciones por aerosoles que se generan fácilmente en las distintas etapas, especialmente en la preparación de la electroforesis y que dan lugar a falsos resultados positivos, como coste de su alta sensibilidad analítica. Posee diversas variantes, entre otras: PCR anidada, PCR semianidada, PCR cooperativa, PCR asimétrica, inmunocaptura-PCR, impresión captura-PCR, escachado captura-PCR, PCR dúplex y múltiple, PCR cuantitativa, PCR en tiempo real, PCR digital, PCR capilar y otras menos comunes. La PCR es teóricamente un método de detección muy sensible. Sin embargo, en la práctica y aplicado a material vegetal, artrópodos, o especialmente ciertos tipos de suelo, la sensibilidad se reduce drásticamente por la presencia de inhibidores, que pueden dar lugar a falsos negativos. Para superar estos inconvenientes es imprescindible incluir un control positivo y varios controles negativos en el conjunto de las muestras. Asimismo, se emplean métodos de purificación de ácidos nucleicos y otras variantes más sensibles basadas en PCR anidada o PCR en tiempo real, alguna de las cuales pueden realizarse con métodos directos de preparación de la muestra. Para la amplificación a partir de ARN (PCR de ARN) debe realizarse una etapa previa de transcripción reversa (RT).

Nucleósido formado por timina y D-ribosa unidas a través de un enlace -glucosídico.

Nucleósido formado por uracilo unido a D-ribosa mediante un enlace -glucosídico.