Diccionario

Enzima derivada de Armoracia rusticana utilizada en la técnica ELISA y otras como marcadora de anticuerpos y de proteína A. El sustrato más idóneo para la peroxidasa es la orto fenildiamina, cuya hidrólisis produce un color amarillo pálido, que una vez paralizada la reacción con ácido sulfúrico 3 N, toma un color naranja rojizo intenso que se puede cuantificar espectrofotométricamente a 450 nm. Es muy utilizada por su rapidez de reacción en la detección de anticuerpos monoclonales de hibridomas y en procesos en los que intervienen células animales, que pueden crear fondos de reacción si se utilizara fosfatasa alcalina como conjugado.

Denominación común en español, que proviene del acrónimo del inglés “Enzyme-Linked Immunosorbent Assay”, o ensayo inmunoenzimático en fase sólida o ensayo por inmunoadsorción ligado a enzimas, popularmente ELISA. Da nombre a una técnica inmunológica o ensayo inmunoenzimático o serológico muy sensible para detectar, cuantificar, identificar o comparar antígenos complejos (agentes patógenos), proteínas, anticuerpos, péptidos u hormonas, incluso en extractos vegetales brutos. Esta prueba se caracteriza por utilizar un soporte insoluble o inmunoadsorbente (microplacas, tubos, pocillos o membranas) para fijar, tapizar o sensibilizar con antígenos o anticuerpos, según la modalidad de técnica. La prueba consiste en una serie de incubaciones mediadas por lavados, hasta adicionar el substrato. Se caracteriza porque la reacción se revela con anticuerpos conjugados enzimáticamente (frecuentemente en Patología vegetal con fosfatasa alcalina de mucosa intestinal de ternera y en ocasiones con peroxidasa de rábano picante) o biotinilados y un sustrato apropiado a la enzima marcadora (p-nitrofenil fosfato en el caso de la fosfatasa alcalina y peróxido de hidrógeno para la peroxidasa). La densidad óptica o valor ELISA final es proporcional a la cantidad de antígeno o anticuerpo detectado y permite asignar un valor numérico a la detección semicuantitativa. Se han diseñado distintas variantes o modalidades: ELISA directo, indirecto, de doble sándwich de anticuerpos (DAS), indirecto doble sándwich de anticuerpos (DASI), y competición. Las modalidades pueden realizarse con anticuerpos policlonales, con anticuerpos monoclonales, con anticuerpos recombinantes o con fragmentos F(ab´)2 de anticuerpo y proteína A conjugada. La técnica ELISA puede realizarse con sustratos solubles o precipitantes.

Enzima oxidativo, con un complejo porfirina-hierro, que cataliza una reacción en la cual el peróxido de hidrógeno es el aceptor de electrones. La mayoría de las peroxidasas se encuentran en las plantas localizadas en la pared, el citosol y las vacuolas. Algunas están implicadas en procesos de polimerización en la pared. La de rábano picante se utiliza para conjugar anticuerpos de uso en detección mediante técnicas ELISA y otras. Su sustrato delator común es el peróxido de hidrógeno (H2O2).