Diccionario

Molécula de ADN marcada (con 32P, 35S, estreptavidina, biotina, proteína A, proteína verde fluorescente, etc.), utilizada para detectar moléculas de ácidos nucleicos de secuencia complementaria por medio de hibridación molecular.

1. Compuesto químico que se une covalentemente a una sonda de ADN para posibilitar la posterior reacción con un compuesto señal. 2. Compuesto químico utilizado para unir a la matriz soporte el primer nucleótido protegido en la síntesis de oligonucleótidos en fase sólida. 3. Fragmento de ADN que codifica un segmento peptídico flexible, utilizado para conectar los genes de las regiones variables (V) de la misma cadena o de cadenas distintas de anticuerpos. De esta manera se han obtenido fragmentos recombinantes de anticuerpos en los que las regiones VH y VL están unidas por un engarce peptídico; estas estructuras se denominan scFv (cadena simple Fv). 4. Segmento de ADN que conecta los nucleosomas entre sí en los organismos eucariotas.

Técnica analítica y de detección en la que una sonda de ADN o ARN marcada radiactivamente se hibrida con material celular fijado. Una autorradiografía de la preparación revela la localización precisa de las secuencias de ADN implicadas en la hibridación. En el ámbito de la Patología Vegetal, se utiliza fundamentalmente para localizar genes o secuencias de agentes patógenos en cromosomas, células y tejidos fijados.

Denominación común de la transferencia tipo Southern, hibridación realizada sobre fragmentos de ADN transferidos a una membrana; el método recibió este nombre en honor a su inventor, Edwin Southern. El ADN intacto (por ejemplo, un perfil de plásmidos) o digerido con una enzima de restricción es separado electroforéticamente por tamaño en un gel, tras lo que se procede a una depurinación (para facilitar la transferencia de fragmentos largos) y desnaturalización de los fragmentos de ADN de doble cadena en sus cadenas sencillas. Posteriormente, el ADN inserto en el gel es transferido a un filtro, frecuentemente de nitrocelulosa, éster de celulosa o nailon, con lo que en el filtro queda representada una réplica de la disposición de los fragmentos de ADN presentes en el gel. El filtro se incuba durante un tiempo con una sonda de ADNss o ARN marcada (radiactivamente, con digoxigenina o con un fluorocromo, entre otros); durante la incubación la sonda se va hibridando con las moléculas de ADN de cadena sencilla de secuencia complementaria (o muy parecida). La sonda unida al fragmento de ADN complementario se puede visualizar en el filtro de una forma sencilla mediante una exposición a una película de rayos X para el caso de sondas radiactivas, mediante revelado con anticuerpos conjugados con fosfatasa alcalina para sondas marcadas con digoxigenina o con una película sensible a la luz para el caso de sondas marcadas con un fluorocromo. Las hibridaciones con sondas marcadas con digoxigenina pueden revelarse también utilizando un sustrato quimioluminiscente, que es degradado por la fosfatasa alcalina y que emite luz; esta luz puede ser captada por una película o digitalmente por una cámara apropiada.

Muestra o porción de ácido nucleico (ADN o ARN) de origen y, generalmente, secuencia conocida, que se marca o conjuga con una sustancia delatora para ser posteriormente reconocida. Generalmente se suelen marcar con isótopos radioactivos, inmunomarcadores como biotina, proteína A, avidina, estreptavidina, digoxigenina, etc., o marcadores de color o fluorescencia.