Diccionario

Denominación común de la transferencia tipo Southern, hibridación realizada sobre fragmentos de ADN transferidos a una membrana; el método recibió este nombre en honor a su inventor, Edwin Southern. El ADN intacto (por ejemplo, un perfil de plásmidos) o digerido con una enzima de restricción es separado electroforéticamente por tamaño en un gel, tras lo que se procede a una depurinación (para facilitar la transferencia de fragmentos largos) y desnaturalización de los fragmentos de ADN de doble cadena en sus cadenas sencillas. Posteriormente, el ADN inserto en el gel es transferido a un filtro, frecuentemente de nitrocelulosa, éster de celulosa o nailon, con lo que en el filtro queda representada una réplica de la disposición de los fragmentos de ADN presentes en el gel. El filtro se incuba durante un tiempo con una sonda de ADNss o ARN marcada (radiactivamente, con digoxigenina o con un fluorocromo, entre otros); durante la incubación la sonda se va hibridando con las moléculas de ADN de cadena sencilla de secuencia complementaria (o muy parecida). La sonda unida al fragmento de ADN complementario se puede visualizar en el filtro de una forma sencilla mediante una exposición a una película de rayos X para el caso de sondas radiactivas, mediante revelado con anticuerpos conjugados con fosfatasa alcalina para sondas marcadas con digoxigenina o con una película sensible a la luz para el caso de sondas marcadas con un fluorocromo. Las hibridaciones con sondas marcadas con digoxigenina pueden revelarse también utilizando un sustrato quimioluminiscente, que es degradado por la fosfatasa alcalina y que emite luz; esta luz puede ser captada por una película o digitalmente por una cámara apropiada.

Denominación común de la transferencia tipo Northern, hibridación realizada sobre los fragmentos de ARN transferidos a una membrana, mediante un proceso análogo al de transferencia Southern, pero de ARN. El análisis Northern se usa para identificar las cadenas de ARN (total, mensajero, vírico, etc.) de secuencia semejante al ADN que se utiliza como sonda, tras separación por electroforesis en condiciones desnaturalizantes (en presencia de formaldehído) y transferencia a una membrana. A diferencia del tipo Southern que se utiliza para identificar ADN, el método Northern sirve para identificar ARN y realizar estudios de expresión génica, para conocer qué genes están activos formando ARNm en qué condiciones y en qué tejidos o tipos celulares.

Técnica analítica utilizada para reconocer ADN recombinante en células clonadas. Las células transformadas representan un pequeño porcentaje de la población total de células en un cultivo. El cultivo se diluye y siembra en una placa de Petri hasta que forme colonias individuales que se ponen en contacto con un disco de membrana de nitrato de celulosa, nailon, o papel (en una posición equivalente a la de las colonias), después se lisan las células y el filtro se trata para favorecer la adherencia del ADN. Al tratar la membrana con una sonda que hibride con el ADN transformado, se localizan las colonias transformadas mediante autorradiografía, o más comúnmente por anticuerpos fluorescentes.

Denominación común.