Diccionario

Derivado de nitrato de la celulosa utilizado como polvo o convertido en filtros de membrana de porosidad definida. Se utiliza para fijar ácidos nucleicos en procedimientos de transferencia Northern y Southern y de proteínas en transferencia Western e inmunoimpresión. Actualmente es reemplazada por membranas de ésteres mezclados de nitrocelulosa, ya que la nitrocelulosa pura seca es explosiva y puede encenderse o explotar por calor, chispas o fricción.

Filtro hidrofílico compuesto por una mezcla de nitrato de celulosa inerte y acetato de celulosa. Su uniforme estructura microporosa confiere excelentes rendimientos en filtros de membrana. Son ideales para la filtración de soluciones acuosas, incluyendo tampones. Son esterilizables en autoclave a 121 °C, 20 minutos. El rango de pH que toleran es de 4 a 10. Han sustituido en la actualidad a las membranas de nitrocelulosa en prácticamente todas sus aplicaciones.

1. Acción de absorber. 2. En serología e inmunología, unión pasiva e inespecífica de anticuerpos o antígenos al vidrio, plástico, nitrocelulosa, u otras superficies. 3. Uso de un antígeno o anticuerpo para eliminar o reducir la concentración de anticuerpos o antígenos, respectivamente, de una mezcla. Se puede realizar en líquido o con antígenos o anticuerpos inmovilizados en una fase sólida. 4. Reducción de la fuerza de una onda electromagnética que se propaga a través de un medio, determinada por las condiciones dieléctricas del material.

Técnica de inmovilizado de dianas de agentes patógenos en un soporte sólido (membrana de papel, nitrocelulosa, éster de celulosa, nailon, etc.) para su posterior detección mediante pruebas inmunológicas, de hibridación o especialmente de amplificación molecular (PCR, RT-PCR, PCR en tiempo real o isotermas). Se presiona hasta aplastar directamente el material vegetal en el soporte sólido durante unos segundos o al posible vector, con ayuda en este caso, del fondo redondeado de un tubo de plástico o vial. Se puede realizar en campo o laboratorio por personal no especializado en métodos de detección o diagnóstico. Las dianas impresas pueden ser conservadas en un lugar oscuro y seco durante meses antes de su análisis o ser remitidas por correo a temperatura ambiente hasta un laboratorio para su procesado. Su uso no implica problemas cuarentenarios y suele ser empleado en pruebas interlaboratorio y como control positivo o negativo (material vegetal certificado sano), en algunos kits de diagnóstico y detección.

Aquella en la que se inmoviliza el ADN o ARN de la muestra desnaturalizado sobre un soporte sólido o filtro, de forma que se impide la autohibridación, que puede ocurrir en medio líquido. Seguidamente se introduce el soporte en una solución con sondas de ácidos nucleicos complementarios y marcados con una molécula delatora. Tras la hibridación y lavado para eliminar los productos que no hayan reaccionado, los híbridos se detectan por autorradiografía, caso de sondas marcadas con 32P o, en la actualidad más frecuentemente, por variados métodos inmunoenzimáticos disponibles. Es la modalidad de hibridación molecular más común que implica la aplicación de una solución de ácido nucleico a un soporte sólido, tal como membranas de nitrocelulosa o de nailon, y la posterior detección con sondas específicas apropiadas.

Técnica que utiliza anticuerpos tras la separación cromatográfica de los componentes de la muestra, nativa o desnaturalizada, en un gel o membrana generalmente de nitrocelulosa.

Técnica serológica que combina un sistema integral de análisis o dispositivo, basado en anticuerpos inmovilizados en una única tira de membrana que posee dos zonas (de conjugado y de captura) y permite la determinación rápida (5-15 minutos) de la presencia o ausencia de un patógeno o sus metabolitos o incluso de diversos analitos, como de dos aislados del mismo virus o de diferentes. Los dispositivos más utilizados en Fitopatología están compuestos por tiras reactivas inmunocromatográficas de nitrocelulosa o éster de celulosa. Para realizar el análisis, se añade una gota de extracto de la muestra o de una suspensión de células del microorganismo por un orificio redondo en la denominada zona de conjugado, mezclada con anticuerpos específicos del patógeno a detectar pero conjugados usualmente con nanopartículas de carbón coloreadas. Si la muestra contiene el antígeno problema, este se unirá a los anticuerpos conjugados formando un complejo que migrará a través de la membrana. Si no, migrarán separados el anticuerpo conjugado y la muestra sin antígeno, sin unirse. En la zona de captura del dispositivo (dos líneas separadas de anticuerpos) se encuentran fijados en una primera línea anticuerpos específicos frente a otro epítopo del antígeno problema. Al llegar la muestra a esta primera línea, los complejos formados por la unión del antígeno (muestra) con el conjugado quedarán retenidos y la línea se coloreará en este caso en rosa, negro o azul, según el color del delator (muestra positiva). En el caso contrario, si las muestras son negativas, aparecerá una segunda línea donde los conjugados sin fijarse al antígeno inexistente, quedarán retenidos por anticuerpos anti la especie animal utilizada en la prueba. Así pues, la aparición de dos líneas (positivo y control) indicarán la presencia del patógeno analizado y la aparición de una única línea de control indicará la ausencia del patógeno o su presencia en concentración inferior al límite de detección de la técnica y sus reactivos. Esta evaluación visual permite el análisis cualitativo y semicuantitativo. Mediante un lector especial, se pueden analizar de forma cuantitativa las tiras reactivas. Además de la rapidez de los resultados y la sencilla manipulación, los ensayos de flujo lateral tienen la ventaja de poder ser utilizadas en condiciones de campo por personal no especializado a un coste económico relativamente bajo.

Técnica serológica de localización de antígenos en secciones de tejido inmovilizadas o impresas en membranas de nitrocelulosa, éster de celulosa o papel. Las secciones de tejido de material vegetal recién cortado se impresionan contra la membrana suave pero firmemente, de manera que se permita la observación de la estructura de la sección. Las huellas o improntas de tejido inmovilizadas se revelan como en una técnica ELISA, frecuentemente directa, con el uso de anticuerpos específicos conjugados con la enzima fosfatasa alcalina. El revelado se realiza con substrato precipitante azul nitrotetrazolio (o cloruro de tetrazolio nitroazul) y 5-bromo-4-cloro indolil fosfato (NBT+BCIP). La presencia de acúmulos de precipitado violeta en la zona vascular indica infección para patógenos vasculares y acúmulos en otras zonas indican la presencia localizada de otros patógenos extracelulares, en función de los anticuerpos utilizados. Es extensivamente empleada en viveros y prospecciones para la detección rutinaria de Closterovirus tristezae (Citrus tristeza virus-CTV), pues es la técnica serológica de referencia usada con anticuerpos monoclonales específicos. La realización de la prueba es sencilla, no requiere de personal especializado para su ejecución que puede efectuarse en condiciones de campo de forma muy económica.

Método para estimar la concentración de fragmentos de ADN o de moléculas de ARN o de proteína presentes en una muestra. Consiste en transferir directamente una alícuota de la muestra sobre una membrana de filtro de nitrocelulosa, éster de celulosa o nailon y en hibridar el ácido nucleico fijado a la membrana con una sonda. Si se trata de proteínas, consiste en hacer reaccionar la proteína de interés fijada a la membrana con un anticuerpo específico, previo marcado o conjugación de la sonda o del anticuerpo con isótopos radioactivos o fluorocromos. Tras lavados, la radiación ionizante o la fluorescencia emitida por la sonda o el anticuerpo se detectan por autorradiografía, fluorografía o imagen digital. Si en la membrana se ha incluido como referencia una serie de diluciones del mismo polinucleótido purificado o de la misma proteína purificada de concentración conocida, es posible cuantificar la cantidad de ácido nucleico o de proteína presente en la muestra analizada, por comparación de la intensidad de la mancha con la de la muestra de referencia. El método permite detectar hasta un picogramo (1 pg) de ácido nucleico; según definición del Vocabulario inglés-español de bioquímica y biología molecular de María V. Saladrigas (www.medtrad.org/panacea.html). Se denomina transferencia puntual cuando se efectúa de forma puntual o por hoyos.

Denominación común de la transferencia tipo Southern, hibridación realizada sobre fragmentos de ADN transferidos a una membrana; el método recibió este nombre en honor a su inventor, Edwin Southern. El ADN intacto (por ejemplo, un perfil de plásmidos) o digerido con una enzima de restricción es separado electroforéticamente por tamaño en un gel, tras lo que se procede a una depurinación (para facilitar la transferencia de fragmentos largos) y desnaturalización de los fragmentos de ADN de doble cadena en sus cadenas sencillas. Posteriormente, el ADN inserto en el gel es transferido a un filtro, frecuentemente de nitrocelulosa, éster de celulosa o nailon, con lo que en el filtro queda representada una réplica de la disposición de los fragmentos de ADN presentes en el gel. El filtro se incuba durante un tiempo con una sonda de ADNss o ARN marcada (radiactivamente, con digoxigenina o con un fluorocromo, entre otros); durante la incubación la sonda se va hibridando con las moléculas de ADN de cadena sencilla de secuencia complementaria (o muy parecida). La sonda unida al fragmento de ADN complementario se puede visualizar en el filtro de una forma sencilla mediante una exposición a una película de rayos X para el caso de sondas radiactivas, mediante revelado con anticuerpos conjugados con fosfatasa alcalina para sondas marcadas con digoxigenina o con una película sensible a la luz para el caso de sondas marcadas con un fluorocromo. Las hibridaciones con sondas marcadas con digoxigenina pueden revelarse también utilizando un sustrato quimioluminiscente, que es degradado por la fosfatasa alcalina y que emite luz; esta luz puede ser captada por una película o digitalmente por una cámara apropiada.

Denominación común de la técnica analítica utilizada para identificar proteínas específicas en una mezcla compleja de proteínas, como la que se presenta en extractos celulares o de tejidos vegetales. La técnica tiene tres etapas: i) separación por tamaño generalmente en un gel de poliacrilamida; ii) transferencia por difusión simple, por vacío o electroforesis a un soporte sólido (membrana de nitrocelulosa, éster de celulosa, o generalmente fluoruro de polivinilideno o PVDF) y, finalmente; iii) visualización colorimétrica mediante ELISA directo o indirecto, con el uso de anticuerpos específicos marcados usualmente con fosfatasa alcalina, o anticuerpos específicos y antiespecie conjugados y un sustrato apropiado. También se puede realizar el revelado mediante quimioluminiscencia, fluorescencia, o radiactividad. Se han diseñado aparatos que permiten la electrotransferencia simultánea a varias membranas, con objeto de revelar las distintas copias con diferentes anticuerpos específicos. Están disponibles comercialmente membranas de nitrocelulosa o fluoruro de polivinilideno, polifluoruro de vinilideno o polivinilideno fluoruro (PVDF) precortadas, compatibles con la mayoría de aparatos de electrotransferencia.