El ARN es un material extremadamente sensible a la degradación por ribonucleasas y debe manejarse con cuidado durante los pasos de aislamiento de ácidos nucleicos. Este es el paso más crítico para preparar con éxito ADNc y realizar una reacción de PCR en tiempo real eficiente y reproducible. Pipetas, puntas, las manos del operador o incluso la propia bancada del laboratorio, pueden ser foco de ribonucleasas. Una vez extraído el ARN, se debe evaluar su pureza, frecuentemente por espectrofotometría. Además de la concentración, la relación de absorbancia entre 260 y 280 nm (A260/A280), debe estar en el rango de 1,8-2,0. Si es inferior, puede sugerir la contaminación de la muestra por fenol, proteínas o por material vegetal.
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inhibición
1. Detención o descenso del crecimiento, replicación o multiplicación de microorganismos. 2. Reducción de la tasa máxima de una reacción química por inhibición no competitiva. 3. Ausencia o bajo rendimiento de una hibridación molecular o de la reacción de amplificación molecular por contaminantes orgánicos (frecuentemente del propio material vegetal o del vector) o inorgánicos incluidos en la muestra y que no se han eliminado en la extracción del ADN o ARN. Se puede detectar su acción utilizando un control interno.