Diccionario

Cualquiera de las enzimas (endonucleasa o exonucleasa) que catalizan la rotura y degradación del ARN.

Grupo de enzimas (nucleasas) con distintas actividades que hidrolizan los enlaces fosfodiéster del ARN. Son extremadamente comunes, lo que resulta crítico para cualquier ARN en un ambiente no protegido. No obstante, se utilizan ARNasas en la caracterización y secuenciación de ARN. Sus abreviaturas en español ARNasa o RNasa.

Enzima que interviene en los procesos de ribointerferencia y de represión de la traducción. Consta de varios dominios, uno con actividad helicasa del ARN, dependiente de ATP (en el extremo amino), un dominio PAZ, dos dominios contiguos con actividad endorribonucleasa III (ARNasa III) en serie y un dominio de unión a ARNbc (en el extremo carboxilo). Desde el punto de vista evolutivo es una enzima muy conservada. Actúa sobre moléculas de ácido ribonucleico de dos tipos: i) ARNbc de 100 o más pares de bases. En este caso, la enzima divide el ARNbc en fragmentos regulares de 21 a 25 pares de bases conforme se va desplazando a lo largo de la molécula; este proceso requiere energía (ATP). Los fragmentos resultantes se denominan ARN interferentes pequeños (ARNsi) (small interfering RNA) y son indispensables para la degradación de ARNm invasores o aberrantes en el fenómeno de la ribointerferencia; o ii) ARN en forma de horquilla de aproximadamente 70 nucleótidos (ARNhc). En este segundo caso, la enzima escinde la horquilla y las zonas no apareadas del ARN horquillado, y libera un fragmento monocatenario de 21 a 23 nucleótidos. Este fragmento se denomina ARN temporal pequeño (small temporal RNA o ARNst) y es indispensable para la regulación postranscripcional de algunos ARNm endógenos.

Sistema de replicación de viroides. A causa de su incapacidad para codificar proteínas propias, los viroides deben activar alguna ARN polimerasa celular preexistente que catalice la amplificación de sus cadenas, en contraste con los virus, que codifican en sus genomas componentes de la enzima que los replica. La naturaleza circular de los ARN viroidales y la presencia en tejidos infectados de cadenas de longitud mayor que la unitaria, sugirió que su replicación transcurre por un mecanismo de círculo rodante en el que la molécula circular (+) (se asigna arbitrariamente esta polaridad a la especie infecciosa más abundante) sirve de molde para que, sobre ella, se sinteticen por transcripción reiterativa cadenas oligoméricas de polaridad complementaria (-). Estos ARNs oligoméricos (-) sirven a su vez de molde para la síntesis de oligómeros (+), que a continuación son cortados en segmentos de longitud unitaria por una ARNasa y finalmente circularizados por una ARN ligasa, generando así la misma especie molecular que inició el ciclo. Un mecanismo similar de círculo rodante se utiliza durante la replicación de diversos virus, como el fago lambda, y algunos plásmidos, y durante la transposición de diversos elementos transponibles.

Marcador que supone una alternativa al bromuro de etidio en electroforesis, pues es más sensible y mucho menos tóxico, pero ha sido sustituido por otros marcadores para PCR. Marca los ácidos nucleicos puros, pero adicionalmente se puede emplear en el etiquetado del ADN dentro de las células para la citometría de flujo y en la microscopía de fluorescencia, tras tratamiento previo con ARNasa, para reducir la cantidad de ARN celular.

El ARN es un material extremadamente sensible a la degradación por ribonucleasas y debe manejarse con cuidado durante los pasos de aislamiento de ácidos nucleicos. Este es el paso más crítico para preparar con éxito ADNc y realizar una reacción de PCR en tiempo real eficiente y reproducible. Pipetas, puntas, las manos del operador o incluso la propia bancada del laboratorio, pueden ser foco de ribonucleasas. Una vez extraído el ARN, se debe evaluar su pureza, frecuentemente por espectrofotometría. Además de la concentración, la relación de absorbancia entre 260 y 280 nm (A260/A280), debe estar en el rango de 1,8-2,0. Si es inferior, puede sugerir la contaminación de la muestra por fenol, proteínas o por material vegetal.

1. Detención o descenso del crecimiento, replicación o multiplicación de microorganismos. 2. Reducción de la tasa máxima de una reacción química por inhibición no competitiva. 3. Ausencia o bajo rendimiento de una hibridación molecular o de la reacción de amplificación molecular por contaminantes orgánicos (frecuentemente del propio material vegetal o del vector) o inorgánicos incluidos en la muestra y que no se han eliminado en la extracción del ADN o ARN. Se puede detectar su acción utilizando un control interno.

Enzima que cataliza la hidrólisis de los enlaces fosfodiéster en los ácidos nucleicos.