Diccionario

Grupo de enzimas (nucleasas) con distintas actividades que hidrolizan los enlaces fosfodiéster del ARN. Son extremadamente comunes, lo que resulta crítico para cualquier ARN en un ambiente no protegido. No obstante, se utilizan ARNasas en la caracterización y secuenciación de ARN. Sus abreviaturas en español ARNasa o RNasa.

Nucleasa que hidroliza los enlaces fosfodiéster del ADN.

Producto muy utilizado en laboratorio para limpiar superficies y de este modo, prevenir la degradación por ribonucleasa y proteger la calidad del ARN de la muestra. Se trata de una proteína de gran tamaño (unos 49 kDa), ácida y rica en leucinas, que forma complejos muy estables con ciertas ribonucleasas, con las que posee una altísima afinidad. Las comerciales protegen el ARN de la degradación a temperaturas de hasta 55 °C. Además de su uso en laboratorio, constituye un componente de la masa proteica total de la célula animal y vegetal y parece que juega un papel en la regulación del tiempo de vida medio del ARN.

El ARN es un material extremadamente sensible a la degradación por ribonucleasas y debe manejarse con cuidado durante los pasos de aislamiento de ácidos nucleicos. Este es el paso más crítico para preparar con éxito ADNc y realizar una reacción de PCR en tiempo real eficiente y reproducible. Pipetas, puntas, las manos del operador o incluso la propia bancada del laboratorio, pueden ser foco de ribonucleasas. Una vez extraído el ARN, se debe evaluar su pureza, frecuentemente por espectrofotometría. Además de la concentración, la relación de absorbancia entre 260 y 280 nm (A260/A280), debe estar en el rango de 1,8-2,0. Si es inferior, puede sugerir la contaminación de la muestra por fenol, proteínas o por material vegetal.

Enzima que interviene en los procesos de ribointerferencia y de represión de la traducción. Consta de varios dominios, uno con actividad helicasa del ARN, dependiente de ATP (en el extremo amino), un dominio PAZ, dos dominios contiguos con actividad endorribonucleasa III (ARNasa III) en serie y un dominio de unión a ARNbc (en el extremo carboxilo). Desde el punto de vista evolutivo es una enzima muy conservada. Actúa sobre moléculas de ácido ribonucleico de dos tipos: i) ARNbc de 100 o más pares de bases. En este caso, la enzima divide el ARNbc en fragmentos regulares de 21 a 25 pares de bases conforme se va desplazando a lo largo de la molécula; este proceso requiere energía (ATP). Los fragmentos resultantes se denominan ARN interferentes pequeños (ARNsi) (small interfering RNA) y son indispensables para la degradación de ARNm invasores o aberrantes en el fenómeno de la ribointerferencia; o ii) ARN en forma de horquilla de aproximadamente 70 nucleótidos (ARNhc). En este segundo caso, la enzima escinde la horquilla y las zonas no apareadas del ARN horquillado, y libera un fragmento monocatenario de 21 a 23 nucleótidos. Este fragmento se denomina ARN temporal pequeño (small temporal RNA o ARNst) y es indispensable para la regulación postranscripcional de algunos ARNm endógenos.

Enzima que hidroliza los enlaces fosfodiéster internos de un ácido nucleico inespecíficamente y lo fragmenta en oligonucleótidos. Cuando el sustrato es el ADN, se denomina endodesoxirribonucleasa y si es el ARN, se denomina endorribonucleasa.

Enzima que hidroliza los enlaces fosfodiéster finales de los ácidos nucleicos, es decir, los de las posiciones 5’ o 3’ y lo fragmenta en sus nucleótidos constituyentes. Cuando el sustrato es el ADN se denomina exodesoxirribonucleasa y si es el ARN se llama exorribonucleasa.

1. Detención o descenso del crecimiento, replicación o multiplicación de microorganismos. 2. Reducción de la tasa máxima de una reacción química por inhibición no competitiva. 3. Ausencia o bajo rendimiento de una hibridación molecular o de la reacción de amplificación molecular por contaminantes orgánicos (frecuentemente del propio material vegetal o del vector) o inorgánicos incluidos en la muestra y que no se han eliminado en la extracción del ADN o ARN. Se puede detectar su acción utilizando un control interno.

Enzima que cataliza la hidrólisis de los enlaces fosfodiéster en los ácidos nucleicos.