Diccionario

Acrónimo de Sistema Ultra Micro Analítico, un tipo de ELISA patentado en Cuba y realizado con pequeños volúmenes del orden de diez microlitros por pocillo, para detección de antígenos o de anticuerpos. Se trata de una reacción rápida y automatizada que tiene como finalidad la economía de tiempo y reactivos.

Denominación común en español, que proviene del acrónimo del inglés “Enzyme-Linked Immunosorbent Assay”, o ensayo inmunoenzimático en fase sólida o ensayo por inmunoadsorción ligado a enzimas, popularmente ELISA. Da nombre a una técnica inmunológica o ensayo inmunoenzimático o serológico muy sensible para detectar, cuantificar, identificar o comparar antígenos complejos (agentes patógenos), proteínas, anticuerpos, péptidos u hormonas, incluso en extractos vegetales brutos. Esta prueba se caracteriza por utilizar un soporte insoluble o inmunoadsorbente (microplacas, tubos, pocillos o membranas) para fijar, tapizar o sensibilizar con antígenos o anticuerpos, según la modalidad de técnica. La prueba consiste en una serie de incubaciones mediadas por lavados, hasta adicionar el substrato. Se caracteriza porque la reacción se revela con anticuerpos conjugados enzimáticamente (frecuentemente en Patología vegetal con fosfatasa alcalina de mucosa intestinal de ternera y en ocasiones con peroxidasa de rábano picante) o biotinilados (véanse ELISA biotina/estreptavidina y sistema biotina/avidina) y un sustrato apropiado a la enzima marcadora (p-nitrofenil fosfato en el caso de la fosfatasa alcalina y peróxido de hidrógeno para la peroxidasa). La densidad óptica o valor ELISA final es proporcional a la cantidad de antígeno o anticuerpo detectado y permite asignar un valor numérico a la detección semicuantitativa. Se han diseñado distintas variantes o modalidades: ELISA directo, indirecto, de doble sándwich de anticuerpos (DAS), indirecto doble sándwich de anticuerpos (DASI), y competición. Las modalidades pueden realizarse con anticuerpos policlonales, con anticuerpos monoclonales, con anticuerpos recombinantes o con fragmentos F(ab´)2 de anticuerpo y proteína A conjugada. La técnica ELISA puede realizarse con sustratos solubles o precipitantes (véase inmunoimpresión-ELISA).

Inmunoensayo que se produce en la superficie de una cámara de reacción representada por un canal de microfluidos. La fuerza capilar dentro del microcanal atrae a los reactivos en la cámara de reacción y también facilita la incubación del ensayo. Una almohadilla subyacente absorbe automáticamente el exceso de líquido, siendo la única operación requerida la carga secuencial de tampones y reactivos. El volumen de muestra es de 10 L y el uso de reactivos es de 5 a 10 veces menor comparado con una técnica ELISA convencional. Se ha aplicado a varios virus de plantas.

Variante de ELISA muy sensible para detección de antígenos complejos (agentes patógenos). De manera secuencial y mediada por etapas de incubación y lavado, se tapizan los pocillos de una microplaca o la superficie de un inmunoadsorbente con anticuerpos purificados específicos del agente patógeno a detectar, se añade la muestra (extracto bruto vegetal, suspensión bacteriana, dilacerado, exudados, lloros de vid, extracto de suelo filtrado, etc.), y se añaden los mismos anticuerpos que en la primera etapa, pero conjugados con una enzima (habitualmente fosfatasa alcalina). La reacción se revela con el substrato específico de la enzima marcadora (habitualmente p-nitrofenil fosfato) que por hidrólisis y efecto batocrómico producirá un color amarillo (valor ELISA a 405 nm) de intensidad proporcional a la enzima retenida. La reacción clásica y más sensible, se realiza añadiendo 200 L/pocillo de la microplaca en cada etapa, aunque para ahorro de reactivos y economía algunos kits comerciales utilizan solo 100 L/pocillo. Otras modalidades utilizan únicamente unos microlitros (véase SUMA). Los anticuerpos utilizados para tapizar o como conjugados pueden ser producidos en la misma especie animal o no. Frecuentemente se utilizan anticuerpos policlonales para tapizado y monoclonales específicos (solos o en mezcla de varios) como conjugados, o ELISA basado completamente en anticuerpos policlonales, en anticuerpos monoclonales o recombinantes de anticuerpos monoclonales, que confieren alta especificidad y sensibilidad. DAS es la modalidad más popular de ELISA para detección de agentes patógenos o sus metabolitos.

Recipiente estándar en investigación y laboratorios de diagnóstico, de 127,6 x 85,75 mm, adaptado a la automatización y pipetas múltiples. Diseñada con 96 pocillos en forma de tubo de fondo plano, de capacidad máxima 350 L, aunque se fabrican de menor volumen/pocillo para técnicas ELISA de formato especial, véase SUMA. Su formato es de 12 columnas de pocillos, numeradas de 1 a 12 y de ocho filas, marcadas con letras de A a H. Su fondo es generalmente plano para permitir lectura espectrofotométrica a través del contenido del pocillo (espesor estándar del fondo 1,20 mm), aunque existen disponibles de fondo en U y en V. Fabricada con poliestireno rígido de gran claridad (también está comercialmente disponible en policloruro de vinilo-PVC flexible o rígida). Las placas se distribuyen con o sin tapa, estériles o no, de alta o baja adherencia y empaquetadas individualmente o en otros formatos, generalmente de cinco placas/paquete. Sin: microplaca, placa de microtitulación.