1. Cualquier sustancia que, al ingresar en un organismo inmunocompetente, estimula la producción de una o varias series de anticuerpos específicos que se unen a ella a través de unos sitios denominados epítopos o determinantes antigénicos. Un mismo antígeno puede contener múltiples epítopos, algunos de los cuales pueden estar repetidos, y cada epítopo es específico de un anticuerpo. Todos los inmunógenos son antigénicos, pero no todos los inmunógenos son immunogénicos La capacidad de un antígeno para reaccionar específicamente con un anticuerpo se denomina reactividad antigénica. 2. Cualquier sustancia que es capaz de unirse de forma específica a un anticuerpo o a un receptor localizado en la superficie de los linfocitos T. Los antígenos que se unen a anticuerpos son de naturaleza extremadamente diversa (pueden ser desde sustancias relativamente sencillas, como los lípidos y las hormonas, hasta macromoléculas más complejas, como los ácidos nucleicos y las proteínas, e incluso virus o un fragmento de célula, por citar unos ejemplos); en cambio, los que se unen con el receptor de superficie de los linfocitos T son únicamente de naturaleza proteínica.
antígeno capsular
antígeno específico de grupo
Antígeno específico y común o conservado en un cierto grupo de virus. Con el mismo se pueden preparar anticuerpos monoclonales o recombinantes totalmente específicos del grupo de virus determinado. Se han localizado en numerosos grupos de virus antígenos específicos de grupo, como un anticuerpo monoclonal (PTY 1) que reconoce a un mayoritario grupo de potivirus transmitidos por pulgón, o aquel anticuerpo monoclonal (MCA13) que reacciona básicamente con aislados agresivos del virus de la tristeza de los cítricos (Closterovirus tristezae, Citrus tristeza virus-CTV).
antígeno específico de tipo
Antígeno específico y muy conservado en ciertos tipos de virus. Con el mismo se pueden preparar anticuerpos monoclonales o recombinantes totalmente específicos del tipo de virus concreto, como aquellos 4DG11, que reaccionan contra aislados Dideron (D) del virus de la viruela del ciruelo (Potyvirus plumpoxi, Plum pox virus-PPV) o sharka tipo D, o el anticuerpo monoclonal AL, que reacciona frente a tipos agresivos Marcus de PPV-M o aquellos específicos de otros tipos de PPV.
antígeno estructural
Aquel que forma parte de la estructura del agente patógeno. En el caso más sencillo, el de los virus, la cápsida o cubierta proteica, es el más usual. Normalmente contiene un solo tipo de proteína en forma de subunidades repetitivas, pero en algunos casos puede poseer hasta siete proteínas diferentes. En bacterias, hongos, oomicetos y nematodos, hay numerosos antígenos estructurales, que pueden ser purificados y utilizados para generar distintos tipos de anticuerpos.
antígeno flagelar
antígeno H
Aquel de la proteína termolábil flagelina, componente mayoritario de los flagelos.
antígeno K
Aquel de las cápsulas y capas mucilaginosas bacterianas, frecuentemente de naturaleza glicoproteica. Distintas cepas de una misma especie pueden poseer antígenos capsulares diferentes en composición química y por tanto los anticuerpos generados frente al antígeno K pueden tener valor para la identificación serológica específica, como en Ralstonia solanacearum.
antígeno nativo
Aquel que presenta su forma y estructura original y no ha sido desnaturalizado.
antígeno O
Aquel constituido por lipopolisacáridos (LPS) termoestables localizados en la pared celular de bacterias (componente mayoritario en las gramnegativas), levaduras y micelio de hongos. El lipopolisacárido es una estructura heterogénea de las bacterias gramnegativas, que permite al microorganismo adaptarse a su ambiente. Su heterogeneidad recae en la naturaleza, orden y unión de los diferentes azúcares que constituyen la cadena polisacarídica del antígeno, en la modificación de estas moléculas de carbohidratos, y en los cambios en la longitud de su cadena. La composición y la longitud de la cadena del antígeno O se asocia a la virulencia del microorganismo y esta característica varía entre cepas bacterianas y aún intracepa. Generalmente se obtiene tras tratamiento de una suspensión celular al baño María o en termobloque (100 °C, durante 10 minutos) o en autoclave durante 1 h a 120 °C.
antígeno recombinante
Aquel obtenido mediante técnicas de ingeniería genética y que es capaz de inducir la síntesis de anticuerpos en un animal inmunizado, o de ser efectivo en seleccionar anticuerpos recombinantes. Además, debe de ser reconocido mediante la reacción antígeno-anticuerpo in vitro. Poseen interés si son muy similares a los antígenos nativos, aunque frecuentemente sufren cambios en sus epítopos que no les permite ser reconocidos por anticuerpos generados con antígenos nativos o no desnaturalizados.
antígeno soluble
Aquel que es capaz de migrar en un medio gelosado y se combinan con anticuerpos solubles en presencia de un electrolito a una temperatura y pH adecuados para formar un complejo visible insoluble o precipitado (reacción de precipitación). Se utiliza para la determinación cualitativa y cuantitativa de antígenos y anticuerpos.
antígeno somático
absorción
1. Acción de absorber. 2. En serología e inmunología, unión pasiva e inespecífica de anticuerpos o antígenos al vidrio, plástico, nitrocelulosa, u otras superficies. 3. Uso de un antígeno o anticuerpo para eliminar o reducir la concentración de anticuerpos o antígenos, respectivamente, de una mezcla. Se puede realizar en líquido o con antígenos o anticuerpos inmovilizados en una fase sólida. 4. Reducción de la fuerza de una onda electromagnética que se propaga a través de un medio, determinada por las condiciones dieléctricas del material.
adsorción
1. Acción y efecto de adsorber. 2. Proceso de atracción de las moléculas o iones de una sustancia en la superficie de otra, siendo el tipo más frecuente el de la adhesión de líquidos y gases en la superficie de los sólidos mediante enlaces químicos o físicos y la de proteínas como los anticuerpos o antígenos en la superficie de placas o tubos ELISA, normalmente de poliestireno, durante su sensibilización o tapizado.
adyuvante incompleto de Freund
Mezcla de aceite y agua que se emulsiona con un antígeno o hapteno para estimular la respuesta inmunitaria a estos.
adyuvante inmunológico
Aquel de estructura química muy variada (sales minerales de aluminio o fosfato cálcico, aceites, adyuvantes de Freund, flagelina, virosomas, liposomas o micropartículas, polisacáridos, etc.), que se utiliza para reforzar la respuesta inmune contra un antígeno o hapteno, suministrado simultáneamente durante la inmunización del animal. En inmunología vegetal los más frecuentes son los adyuvantes completo e incompleto de Freund.
afinidad
1. Proximidad, analogía, compatibilidad o semejanza de una cosa a otra. 2. Grado de reactividad de un compuesto o grupo funcional con un reactivo dado. Se utiliza en relación con la interacción específica que se produce entre una enzima y su sustrato o bien entre un anticuerpo y un antígeno.
agar
Polisacárido que se extrae y purifica de algunas algas marinas (rodofíceas). Es utilizado para la solidificación de medios de cultivo o de sustratos para inmunodifusión de antígenos y anticuerpos.
aglutinación
Formación de coágulos o flóculos de antígenos, debidos a la reacción de determinantes antigénicos de superficie de la célula o partícula, con anticuerpos específicos. Técnica serológica rápida y sencilla, que no precisa de preparación previa de la muestra. Se realiza en portaobjetos o placas especiales con pocillos redondeados, posee mediana sensibilidad y precisa de elevadas cantidades de anticuerpos por lo que ha caído en desuso.
aglutinación pasiva
Tipo de técnica serológica de aglutinación en la que los antígenos o los anticuerpos están marcados con látex, bentonita o metales en estado coloidal, con el fin de facilitar la formación de flóculos detectables a simple vista o bajo lupa binocular. Es más sensible que la aglutinación simple y se aplicó extensivamente para la detección de virus de la patata o papa en programas de certificación, antes de la puesta a punto de la técnica ELISA.
aglutinado
1. Resultado positivo en una prueba serológica de aglutinación, en la que antígenos y anticuerpos se unen o reconocen formando grumos visibles. Indica la presencia de anticuerpos específicos contra un antígeno en la muestra analizada. 2. Se aplica a estructuras pegadas entre sí, pero no fusionadas, como ocurre con algunas esporas de Acremonium y Fusarium, que se mantienen unidas mediante un mucílago.
análisis radioinmunoensayo
Técnica inmunológica de determinación cuantitativa de antígenos o anticuerpos mediante el uso de reactivos marcados con isótopos radiactivos.
análisis serológico
Estudio químico y bioquímico de los sueros, especialmente del antisuero de animales inmunizados (antisuero), que incluye a los anticuerpos monoclonales específicos y anticuerpos recombinantes, y su uso para detectar, cuantificar o identificar antígenos o anticuerpos.
anticuerpo
Proteína nueva o alterada (molécula de inmunoglobulina del suero) producida por los linfocitos B de la sangre de un animal, en respuesta a un estímulo antigénico (sustancia extraña); reacciona uniéndose específicamente con el antígeno o hapteno que lo indujo, para neutralizarlo o bloquearlo. Los anticuerpos pueden causar lisis, aglutinación o precipitación del antígeno.
anticuerpo recombinante, AR
Cualquier molécula, expresada en un sistema heterólogo, que sea capaz de reconocer o unirse específicamente a epítopos en moléculas antigénicas, o no. Son sintéticos, producidos por técnicas de ingeniería genética y constituidos por fragmentos de anticuerpo producidos al expresar genes de anticuerpo en fagos, bacterias, levaduras, o plantas transgénicas. Su producción no precisa animales inmunizados, pues se basa en genotecas sintéticas, aunque pueden obtenerse de genotecas de linfocitos B de animales inmunizados o de hibridomas. Normalmente están formados por el fragmento variable (scFv, del inglés single chain variable fragment) de la cadena pesada y ligera de una inmunoglobulina (responsables del reconocimiento del antígeno) unidas por un péptido sintético que trata de reproducir su posición espacial apta para reconocer epítopos. Se suelen estabilizar con cremalleras de leucina y dominios y pueden constituir conjugados sintéticos al llevar enzimas como producto de fusión. Su expresión en plantas transgénicas puede inmunomodular la infección y conferir artificialmente resistencia mediante los denominados fitoanticuerpos.
antisuero homólogo
Aquel obtenido de un antígeno determinado (patógeno específico) y que contiene anticuerpos que inicialmente reaccionarán contra él. Únicamente un máximo del 10 % de las inmunoglobulinas de un antisuero (anticuerpos policlonales) reaccionarán específicamente frente al antígeno inmunizante, el resto (gran mayoría) serán parte del patrimonio inmunitario del animal inmunizado, pero no reaccionarán frente al antígeno de interés. Por tanto, un antisuero homólogo garantiza reacción preferente frente al antígeno homólogo, pero no única debido a las frecuentes reacciones cruzadas con otros antígenos.
choque anafiláctico
Reacción grave (edema, desmayo, dificultades respiratorias) y a veces mortal (colapso de los vasos sanguíneos), provocada por un antígeno inmunizante al que un animal experimental ha estado expuesto con anterioridad. Por ello, sucede tras la primera inmunización en subsiguientes inyecciones de recuerdo, más frecuentemente si estas son intravenosas.
colorante fluorescente
Sustancia química que emite fluorescencia cuando se somete a una determinada radiación electromagnética o longitud de onda. Suelen utilizarse en microscopía de fluorescencia para la obtención de imágenes de células. La técnica es muy valiosa para la detección de bacterias, cromosomas, componentes celulares, reacciones o interacciones antígeno-anticuerpo en muestras vegetales o en sus extractos in vitro. Los más utilizados son rodamina B e isotiocianato de fluoresceína (FITC).
conjugado
Anticuerpo, antígeno, sustancia inerte, metal, proteína o agente patógeno marcado con enzimas (normalmente fosfatasa alcalina o peroxidasa), biotina, avidina o estreptavidina, isotiocianato de fluoresceína u otros fluorocromos, proteína verde fluorescente, oro coloidal, hierro o cualquier elemento, compuesto o sustancia que le confiera nuevas propiedades delatoras. El objetivo del marcado es facilitar la detección o cuantificación de un organismo o compuesto tras producirse la reacción antígeno-anticuerpo, su multiplicación en una colonia o la infección en una planta convencional o transgénica.
cromatografía de afinidad
En ella la fase estacionaria para la cromatografía está constituida por una matriz inerte unida covalentemente a un ligando, que sirve de soporte. Esta modalidad es la más común para purificación de proteínas. La separación de una sustancia de una mezcla se basa en el uso de interacciones moleculares altamente específicas, como son la interacción entre antígeno y anticuerpos, enzimas y sustratos o receptores y ligandos.
desalado
Procedimiento para la eliminación de las sales de una mezcla de moléculas biológicas de alto peso molecular. Se logra mediante infiltración en un gel, diálisis o ultrafiltración molecular. Técnicas similares se emplean para la eliminación de otras moléculas pequeñas de soluciones de proteínas o ácidos nucleicos, como la eliminación del fenol en extractos de ácidos nucleicos, de antígenos tratados con formaldehido, o del exceso de colorante en el marcaje de anticuerpos con isotiocianato de fluoresceína.
determinante antigénico
Porción de la estructura del antígeno a la que se une el anticuerpo específico.
disruptor ultrasónico
Aparato generador de ondas ultrasónicas de alta densidad, más allá del rango audible, capaces de destruir células bacterianas y otros microorganismos. Se utiliza para limpieza, incluso esterilización de instrumentos y para lisar y disgregar bacterias y hongos y utilizarlos como antígeno en inmunizaciones. Su uso puede incrementar la sensibilidad de algunas técnicas serológicas al aumentar el número de dianas disponibles de una sola célula bacteriana.
dosis de recuerdo
Administración de una cantidad de antígeno adicional, en un protocolo de inmunización de un animal experimental, para aumentar la velocidad o la intensidad de la respuesta inmunitaria de una inmunización previamente realizada.
ELISA
Denominación común en español, que proviene del acrónimo del inglés “Enzyme-Linked Immunosorbent Assay”, o ensayo inmunoenzimático en fase sólida o ensayo por inmunoadsorción ligado a enzimas, popularmente ELISA. Da nombre a una técnica inmunológica o ensayo inmunoenzimático o serológico muy sensible para detectar, cuantificar, identificar o comparar antígenos complejos (agentes patógenos), proteínas, anticuerpos, péptidos u hormonas, incluso en extractos vegetales brutos. Esta prueba se caracteriza por utilizar un soporte insoluble o inmunoadsorbente (microplacas, tubos, pocillos o membranas) para fijar, tapizar o sensibilizar con antígenos o anticuerpos, según la modalidad de técnica. La prueba consiste en una serie de incubaciones mediadas por lavados, hasta adicionar el substrato. Se caracteriza porque la reacción se revela con anticuerpos conjugados enzimáticamente (frecuentemente en Patología vegetal con fosfatasa alcalina de mucosa intestinal de ternera y en ocasiones con peroxidasa de rábano picante) o biotinilados y un sustrato apropiado a la enzima marcadora (p-nitrofenil fosfato en el caso de la fosfatasa alcalina y peróxido de hidrógeno para la peroxidasa). La densidad óptica o valor ELISA final es proporcional a la cantidad de antígeno o anticuerpo detectado y permite asignar un valor numérico a la detección semicuantitativa. Se han diseñado distintas variantes o modalidades: ELISA directo, indirecto, de doble sándwich de anticuerpos (DAS), indirecto doble sándwich de anticuerpos (DASI), y competición. Las modalidades pueden realizarse con anticuerpos policlonales, con anticuerpos monoclonales, con anticuerpos recombinantes o con fragmentos F(ab´)2 de anticuerpo y proteína A conjugada. La técnica ELISA puede realizarse con sustratos solubles o precipitantes.
ELISA competición
Variante de ELISA usada en comparación de antígenos (como agentes patógenos) para establecer mapas epitópicos o parentescos serológicos, que está basada en la competición de dos antígenos por un sitio común de reacción de un anticuerpo. Se realiza mediante dos reacciones en paralelo. En una reacción en una placa tapizada con anticuerpos, se añaden antígenos conjugados, homólogos de los anticuerpos, y se valora su densidad óptica final. En la reacción en paralelo, a una placa similar se añade el antígeno homólogo usado en la reacción primera (en concentración conocida) en mezcla con el antígeno distinto que se desee comparar y se valora la densidad óptica de esta segunda reacción. Al comparar los valores ELISA finales de ambas reacciones se puede cuantificar la competición, si esta existiera, por los sitios de unión de los anticuerpos utilizados. A mayor similitud entre ambos antígenos, más competición y menor valor ELISA.
ELISA directo, ELISA D
Variante de ELISA para valorar anticuerpos conjugados o para detectar antígenos. Sobre una microplaca (o un inmunoadsorbente) tapizada con antígeno, se añaden los anticuerpos específicos del antígeno, marcados con una enzima o biotinilados y se incuban. En la etapa final, tras añadir el sustrato se obtendrá un valor ELISA (densidad óptica) proporcional a la cantidad de enzima fijada, que sugerirá la dosis de conjugado a emplear, caso de que el mismo sea válido o se observará si ha existido reacción con la muestra tapizada en la que se deseaba detectar un patógeno concreto. Esta técnica está en desuso para la detección de antígenos (agentes patógenos) pues exige la preparación de conjugados para cada antígeno a detectar, problemática resuelta por ELISA indirecto.
ELISA doble sándwich de anticuerpos indirecto, ELISA-DASI
Variante de ELISA DAS (doble sándwich de anticuerpos) combinada con el sistema de revelado de ELISA indirecto. Se realizan los mismos pasos, pero requiere producir anticuerpos específicos en dos especies animales distintas. Se evita realizar conjugados al revelar la reacción con anticuerpos específicos (como los empleados en la fase primera de tapizado) y tras incubación y lavado se añaden inmunoglobulinas anti la especie animal utilizada para generar los anticuerpos específicos frente al patógeno de interés, pero conjugados, con una enzima. Se suele utilizar con anticuerpos policlonales de conejo en la fase de tapizado y anticuerpos monoclonales específicos de ratón, y revelar con inmunoglobulinas de cabra antirratón conjugadas con una enzima (normalmente fosfatasa alcalina). La modalidad es muy sensible (capaz de detectar del orden de 0,05-0,1 g de antígeno), pues permite amplificar la reacción con la adición de inmunoglobulinas anti especie marcadas.
ELISA doble sándwich de anticuerpos, ELISA-DAS
Variante de ELISA muy sensible para detección de antígenos complejos (agentes patógenos). De manera secuencial y mediada por etapas de incubación y lavado, se tapizan los pocillos de una microplaca o la superficie de un inmunoadsorbente con anticuerpos purificados específicos del agente patógeno a detectar, se añade la muestra (extracto bruto vegetal, suspensión bacteriana, dilacerado, exudados, lloros de vid, extracto de suelo filtrado, etc.), y se añaden los mismos anticuerpos que en la primera etapa, pero conjugados con una enzima (habitualmente fosfatasa alcalina). La reacción se revela con el substrato específico de la enzima marcadora (habitualmente p-nitrofenil fosfato) que por hidrólisis y efecto batocrómico producirá un color amarillo (valor ELISA a 405 nm) de intensidad proporcional a la enzima retenida. La reacción clásica y más sensible, se realiza añadiendo 200 L/pocillo de la microplaca en cada etapa, aunque para ahorro de reactivos y economía algunos kits comerciales utilizan solo 100 L/pocillo. Otras modalidades utilizan únicamente unos microlitros Los anticuerpos utilizados para tapizar o como conjugados pueden ser producidos en la misma especie animal o no. Frecuentemente se utilizan anticuerpos policlonales para tapizado y monoclonales específicos (solos o en mezcla de varios) como conjugados, o ELISA basado completamente en anticuerpos policlonales, en anticuerpos monoclonales o recombinantes de anticuerpos monoclonales, que confieren alta especificidad y sensibilidad. DAS es la modalidad más popular de ELISA para detección de agentes patógenos o sus metabolitos.
ELISA F(ab’)2
Variante de ELISA para detectar antígenos o para titular anticuerpos, en la que se evita realizar conjugados de los anticuerpos específicos en laboratorio. El inmunoadsorbente o microplaca se tapiza con fragmentos F(ab’)2 de IgG obtenidos mediante una sencilla digestión de los anticuerpos con pepsina, el antígeno se detecta con anticuerpos completos (de la misma fuente u origen anterior o de diferente) y finalmente, la reacción se revela mediante proteína A conjugada con enzimas u otro producto para otras aplicaciones (la proteína A reacciona con la porción Fc de las inmunoglobulinas completas). La proteína A comercializada posee una calidad contrastada y es distribuida por numerosas empresas.
ELISA indirecto, ELISA I
Variante de ELISA usada para detectar antígenos, establecer parentescos serológicos entre ellos o titular anticuerpos en diluciones seriadas. Sobre una microplaca o un inmunoadsorbente tapizado con antígeno (o muestra en la que desea verificar la presencia del antígeno de interés), se añaden los anticuerpos específicos del antígeno y tras incubación y lavado se añaden inmunoglobulinas anti la especie animal utilizada para obtener los anticuerpos específicos, marcadas con una enzima o biotiniladas Esta modalidad evita tener que preparar conjugados para cada anticuerpo específico y como quiera que las inmunoglobulinas anti especie son muy utilizadas en análisis clínicos, están disponibles comercialmente con una alta calidad contrastada. Las más usuales son las de cabra anticonejo para anticuerpos policlonales de antisueros o de cabra antirratón para anticuerpos monoclonales, marcadas con fosfatasa alcalina o peroxidasa.
ELISA proteína A
Variantes de ELISA en las que se tapiza el inmunoadsorbente con proteína A y seguidamente se añaden los anticuerpos para captar antígeno, con lo que se logra que prácticamente todos los anticuerpos de tapizado queden inmovilizados en el inmunoadsorbente en posición idónea para reconocer al antígeno, puesto que quedarán fijados por su porción Fc y exhibirán sus cadenas variables con sus paratopos libremente. También se suele aplicar el término a aquellas modalidades de ELISA en la que se utilice proteína A conjugada, tanto para sustratos soluble como para precipitantes.
ensayo serológico
1. Conjunto de técnicas que permiten comprobar y valorar cuantitativamente la presencia de anticuerpos en la sangre de animales inmunizados, de anticuerpos monoclonales en hibridomas segregantes o de anticuerpos recombinantes establecidos in vitro o expresados en fagos, levaduras, bacterias, o in planta. 2. Prueba en la que se emplean anticuerpos específicos para detectar los antígenos (agentes patógenos o sus metabolitos), cuantificar su número y establecer relaciones de parentesco serológico mediante técnicas in vitro entre las cuales las más utilizadas actualmente en Fitopatología son las inmunoenzimáticas ELISA y la inmunofluorescencia.
epítopo
Determinante antigénico de estructura definida o un hapteno, que es capaz de inducir la síntesis de anticuerpos en el animal inmunizado. Se combina o es reconocido por el paratopo del anticuerpo. La excepción son los epítopos lineales, que son determinados por la secuencia de aminoácidos (la estructura primaria) en vez de por la forma tridimensional (estructura terciaria) de una proteína, que constituye los epítopos conformacionales. Se pueden establecer mapas epitópicos de agentes patógenos completos si se dispone de anticuerpos monoclonales específicos pues cada uno de ellos reaccionará únicamente con un epítopo del antígeno (agente patógeno).
equivalencia
1. Igualdad en el valor, estimación, potencia, parámetros de diagnóstico, virulencia o eficacia de dos o más cosas, kits, patógenos, vectores o personas. 2. Factor que interviene en la reacción antígeno-anticuerpo en algunas técnicas serológicas de aglutinación y precipitación, por el cual solo se produce la reacción cuando se dan ciertas concentraciones relativas de antígeno y de anticuerpo (zona de equivalencia), no produciéndose la reacción en situaciones de exceso o defecto de uno y otro. Ello afecta a la sensibilidad de la detección de estas técnicas serológicas, y por ello están en desuso. No se produce en técnicas serológicas como inmunofluorescencia o ELISA.
escala de laboratorio
Proceso llevado a cabo mediante el uso de pequeñas cantidades de reactivos o de antígenos control, anticuerpos, conjugados, iniciadores, etc., para evaluar la naturaleza de los productos o las características de la reacción o de un posible estuche de diagnóstico o detección.
Fab
Fragmento de anticuerpo (IgG) obtenido al tratar las cadenas pesadas con papaína. Cada fragmento Fab separado es aún capaz de unirse a una molécula de antígeno. Son útiles para técnicas de detección basadas en ELISA.
fluorocromo
Componente de una molécula que hace que esta sea fluorescente. Es un grupo funcional de la molécula que absorbe energía de una longitud de onda específica y la vuelve a emitir en otra determinada de mayor longitud de onda, es decir, con menor energía. La cantidad de energía emitida y su longitud de onda dependen tanto del propio fluorocromo como de su ambiente químico. Se utilizan para marcar ciertas estructuras celulares destacándolas del resto de los elementos que componen la célula, lo que permite identificar distintas moléculas o conjuntos de moléculas. Puede tener afinidad por distintos elementos celulares o puede ser acoplado químicamente a otras moléculas, como anticuerpos que específicamente reconocen a antígenos. Así pueden ser utilizados en inmunofluorescencia (para visualizar células bacterianas o fúngicas), en inmunohistoquímica (utilizada en Bacteriología y Virología) o en el análisis o detección de ADN mediante la técnica de PCR en tiempo real. El isotiocianato de fluoresceína, reactivo derivado de la fluoresceína es uno de los fluorocromos más habituales, otros comunes son los derivados de la rodamina, cumarina y cianina. Las nuevas generaciones como el Alexa Flúor o los DyLight Flúor y otros, son generalmente más fotoestables, brillantes y menos sensibles al pH que otros colorantes estándar de excitación.
fragmento Fab
Aquel de anticuerpo obtenido mediante hidrólisis con papaína de una molécula de inmunoglobulina. Consiste en una cadena ligera unida a la parte N-terminal de la cadena pesada contigua. En el mismo reside la especificidad del anticuerpo y, por tanto, la posibilidad de reconocer antígenos.