Diccionario

1. Técnica inmunológica que utiliza anticuerpos conjugados con colorantes fluorescentes. La reacción antígeno-anticuerpo se observa con un microscopio óptico dotado de epiiluminación ultravioleta. Debido a su buena sensibilidad analítica, es muy utilizada para detectar células bacterianas. Puede ser directa o indirecta, esta segunda es la más usada en Fitopatología y en ella se añade el anticuerpo específico y luego un anticuerpo antiespecie marcado generalmente con isotiocianato de fluoresceína. 2. (flow immunofluorescence). Técnica analítica inmunológica en la que se forma un complejo entre un colorante fluorescente y anticuerpos específicos contra la proteína a identificar. El complejo se reconoce en flujo mediante separadores de células automatizados en los que la fluorescencia se registra de forma sensible mediante un fotomultiplicador.

La que se realiza sobre un cultivo o aislamiento en placas de Petri de medio sólido, sembradas con un extracto o un dilacerado de una muestra. La técnica de inmunofluorescencia se realiza sobre el medio sólido desecado. Permite detectar específicamente colonias de la especie bacteriana de interés directamente de un aislamiento, sin purificación. Es muy sensible pues al realizarse sobre colonias permite detectar con sensibilidad colonias incipientes de tamaño mínimo.

Aquellos imprescindibles para la observación efectiva y segura para el operador de la fluorescencia emitida al iluminar superiormente (epi-fluorescencia) con luz ultravioleta una muestra tratada. Básicamente son: i) filtro de excitación, (excitation filter) para seleccionar el espectro de excitación; ii) espejo dicroico (dichroic mirror), refleja la parte del espectro necesaria para la excitación y transmite el resto; y iii) filtro de barrera (barrier filter) que deja pasar únicamente la parte de emisión de la muestra que interesa al observador.

Acrónimo del inglés. Denominación común de la tinción con 4′, 6-diamidino-2-fenilindol, polvo amarillo soluble en agua, marcador fluorescente que se une a regiones enriquecidas en adenina y timina en secuencias de ADN. Se utiliza en microscopía de fluorescencia para teñir células muertas ya que no atraviesa pasivamente la membrana celular y solo lo transportan activamente al citoplasma las células vivas. Se emplea para detección de infección por micoplasmas en cultivos celulares y para la medición del contenido nuclear y la clasificación de cromosomas en citometría de flujo, evaluación de la apoptosis, detección de ADN en núcleo y organelos en inmunofluorescencia e hibridación in situ, Ha sido muy utilizado para localizar fitoplasmas en el floema de plantas sospechosas de estar infectadas. Puede sustituir al bromuro de etidio en tinciones de ADN en geles de agarosa.

1. Acción y efecto de decolorar o perder el color típico y original. 2. (fading). Pérdida gradual de la intensidad de la fluorescencia emitida por células o tejidos marcados con isotiocianato de fluoresceína, al ser iluminados con luz ultravioleta, en la técnica de inmunofluorescencia.

Disminución de la intensidad (brillo) de la muestra en inmunofluorescencia, debido a la descomposición irreversible de la fluorescencia de las moléculas. Este fenómeno está directamente relacionado con la intensidad de excitación y con el tiempo de excitación de la muestra. Para reducir significativamente este efecto, se añade generalmente glicerina tamponada a la muestra montada.

Proceso de incremento artificial de las células bacterianas presentes en un extracto o dilacerado de una muestra, mediante adición de un medio de cultivo líquido, preferiblemente semiselectivo o selectivo de la bacteria diana, e incubación adecuada. El enriquecimiento aumenta la sensibilidad de detección de técnicas de aislamiento, inmunológicas (inmunofluorescencia o ELISA), de hibridación molecular y de amplificación molecular (PCR y PCR en tiempo real). Su ventaja es que permite detectar células viables. Se puede aplicar a microorganismos que puedan ser cultivados in vitro.

1. Conjunto de técnicas que permiten comprobar y valorar cuantitativamente la presencia de anticuerpos en la sangre de animales inmunizados, de anticuerpos monoclonales en hibridomas segregantes o de anticuerpos recombinantes establecidos in vitro o expresados en fagos, levaduras, bacterias, o in planta. 2. Prueba en la que se emplean anticuerpos específicos para detectar los antígenos (agentes patógenos o sus metabolitos), cuantificar su número y establecer relaciones de parentesco serológico mediante técnicas in vitro entre las cuales las más utilizadas actualmente en Fitopatología son las inmunoenzimáticas ELISA y la inmunofluorescencia.

1. Igualdad en el valor, estimación, potencia, parámetros de diagnóstico, virulencia o eficacia de dos o más cosas, kits, patógenos, vectores o personas. 2. Factor que interviene en la reacción antígeno-anticuerpo en algunas técnicas serológicas de aglutinación y precipitación, por el cual solo se produce la reacción cuando se dan ciertas concentraciones relativas de antígeno y de anticuerpo (zona de equivalencia), no produciéndose la reacción en situaciones de exceso o defecto de uno y otro. Ello afecta a la sensibilidad de la detección de estas técnicas serológicas, y por ello están en desuso. No se produce en técnicas serológicas como inmunofluorescencia o ELISA.

Sustancia del grupo de los xantenos que genera un intenso color fluorescente verde en soluciones alcalinas. Al exponerse a la luz ultravioleta emite luz fluorescente de una longitud de onda larga. El isotiocianato de fluoresceína, es comúnmente utilizado para marcar anticuerpos aptos para técnicas de inmunofluorescencia.

Componente de una molécula que hace que esta sea fluorescente. Es un grupo funcional de la molécula que absorbe energía de una longitud de onda específica y la vuelve a emitir en otra determinada de mayor longitud de onda, es decir, con menor energía. La cantidad de energía emitida y su longitud de onda dependen tanto del propio fluorocromo como de su ambiente químico. Se utilizan para marcar ciertas estructuras celulares destacándolas del resto de los elementos que componen la célula, lo que permite identificar distintas moléculas o conjuntos de moléculas. Puede tener afinidad por distintos elementos celulares o puede ser acoplado químicamente a otras moléculas, como anticuerpos que específicamente reconocen a antígenos. Así pueden ser utilizados en inmunofluorescencia (para visualizar células bacterianas o fúngicas), en inmunohistoquímica (utilizada en Bacteriología y Virología) o en el análisis o detección de ADN mediante la técnica de PCR en tiempo real. El isotiocianato de fluoresceína, reactivo derivado de la fluoresceína es uno de los fluorocromos más habituales, otros comunes son los derivados de la rodamina, cumarina y cianina. Las nuevas generaciones como el Alexa Flúor o los DyLight Flúor y otros, son generalmente más fotoestables, brillantes y menos sensibles al pH que otros colorantes estándar de excitación.

Instrumento para realizar mezclas u homogeneizaciones en laboratorio. Funcionan por la acción de palas gemelas oscilantes que alternativamente actúan sobre la muestra contenida en el interior de una bolsa de plástico estéril. La velocidad y tiempo de acción de las palas es regulable. No generan contaminación cruzada entre muestras ni sobrecalientan las mismas. Son útiles para mezcla y disolución de productos en líquidos, lavado y preparación de muestras de suelo, lavados superficiales, enjuagues, preparación de muestras para inmunofluorescencia o PCR en tiempo real para hongos y bacterias. No desgarran ni trituran el material vegetal, especialmente si es leñoso, por lo que no generan homogenizados o extractos brutos recomendables para detección de virus o patógenos vasculares. El más conocido es el modelo Stomacher de la marca Seward, nombre por el que a menudo se conocen este tipo de homogeneizadores.

1. Proceso físico o químico utilizado para fijar enzimas, anticuerpos u otras proteínas, ácidos nucleicos, bacterias, hongos, oomicetos, extractos vegetales de plantas infectadas por virus o viroides y cultivos de células animales o vegetales, o bien orgánulos obtenidos de los mismos, a un soporte o atraparlos en una matriz sólida. Los inmovilizados se utilizan frecuentemente para detección y diagnóstico, como en las técnicas de inmunofluorescencia, ELISA o inmunocaptura-PCR o como biocatalizadores en procesos de flujo continuo, como en columnas de cromatografía. Existen diversos métodos de inmovilización: i) inclusión en membranas semipermeables; ii) atrapado en materiales poliméricos, como acetato de celulosa, acrilamida, alginato, etc.; iii) adsorción sobre soportes cargados eléctricamente; iv) absorción sobre soportes porosos; v) unión covalente a un material de soporte activado, o vi) entrecruzamiento de proteínas o células, empleando o no, material de soporte. 2. Conversión de un elemento desde formas inorgánicas a formas orgánicas integradas en microorganismos o en el tejido vegetal.

Prueba analítica basada en la alta especificidad de la interacción entre un anticuerpo y un antígeno. La medida de la interacción puede ser cuantitativa o semicuantitativa. La mayoría en Fitopatología se basan en técnicas ELISA o de inmunofluorescencia (o históricamente en aglutinación e inmunodifusión), o colaboran con técnicas de hibridación molecular o de amplificación molecular, para la captura de dianas o el revelado de la reacción.

Compuesto fluorocromado frecuentemente usado para teñir protoplastos e identificar así los productos de fusión y como marcador de anticuerpos confiriéndoles propiedades fluorescentes para su uso en inmunofluorescencia.

Denominación común del efectuado para detectar bacterias u otros organismos mediante un tampón apropiado o agua estéril absorbida a través de una sección de tallo o sarmiento, cuya base está depositada en un vaso de precipitado. El líquido se hace pasar a través del material vegetal por succión con una jeringa conectada a una goma elástica para asegurar la estanqueidad. Se han diseñado dispositivos manuales para la obtención de líquido de lavado interno de distintas muestras simultáneamente. También puede realizarse haciendo pasar líquido a través de la sección de material vegetal con ayuda de la presión realizada con una jeringa que contiene el líquido. Los primeros mililitros de líquido así obtenido se han utilizado para aislamiento, detección serológica (inmunofluorescencia o ELISA) o para amplificación molecular (PCR convencional o en tiempo real) de patógenos vasculares, como las especies bacterianas Xylophilus ampelinus o Xylella fastidiosa e incluso cepas tumorígenas de Allorhizobium vitis en vid.

Microscopio óptico que utiliza luz ultravioleta (200-400 nm), que al ser de longitud de onda más corta que la visible, permite obtener mayor resolución. Al ser la luz UV dañina para las células, los materiales vivos solo pueden ser inspeccionados durante cortos períodos de tiempo y mediante un sistema de visualización indirecta. La radiación se hace visible al proyectarla sobre una pantalla fluorescente, mediante un circuito cerrado de televisión o registrando la imagen en una placa fotográfica. Se utiliza en la técnica de inmunofluorescencia (normalmente con iluminación epifluorescente) para detectar específicamente especies bacterianas reconocidas por anticuerpos específicos conjugados con sustancias fluorescentes, a través de un filtro protector. También se utiliza para examinar cromosomas y otros materiales que contengan ácidos nucleicos, los cuales absorben fuertemente la luz ultravioleta.

1. Capa sencilla de células que forman las células dependientes de anclaje en la superficie de la matriz de soporte sobre la que están creciendo. 2. Capa sencilla de anticuerpos para el tapizado de placas de ELISA que se logra sensibilizando previamente la placa con proteína A y añadiendo después anticuerpos, que además quedarán con sus paratopos libres y receptivos (orientados), al quedar fijados por su fragmento Fc. 3. Capa única de células bacterianas o fúngicas para tapizar placas y realizar ELISA directo, indirecto o inmunofluorescencia; la formación de multicapas de antígeno disminuye la sensibilidad al ser más fácilmente arrastradas durante los lavados.

Técnica de concentración de agentes patógenos, sus componentes o metabolitos, mediante microesferas, partículas o cuentas magnetizables revestidas o sensibilizadas con anticuerpos, preferiblemente con monoclonales específicos. Las células o partículas atrapadas específicamente, cuando pasan a través de un campo magnético son concentradas y lavadas para eliminar inhibidores, pudiendo ser detectadas de forma sensibles mediante cultivo y aislamiento en medio sólido, técnicas serológicas (inmunofluorescencia o ELISA), de hibridación o de amplificación molecular.

Sustancia química que emite fluorescencia cuando se somete a una determinada radiación electromagnética o longitud de onda. Suelen utilizarse en microscopía de fluorescencia para la obtención de imágenes de células. La técnica es muy valiosa para la detección de bacterias, cromosomas, componentes celulares, reacciones o interacciones antígeno-anticuerpo en muestras vegetales o en sus extractos in vitro. Los más utilizados son rodamina B e isotiocianato de fluoresceína (FITC).

Sistema de iluminación superior con luz ultravioleta en un microscopio de fluorescencia. En el mismo, la luz que incide sobre la muestra estudiada no la atraviesa, sino que la misma lente ilumina y recibe la luz emitida por la muestra. Su funcionamiento se basa en la propiedad de fluorescencia que tienen ciertas moléculas denominadas fluorocromos.

Elemento, isótopo o compuesto químico que, unido a una molécula, orgánulo, fragmento subcelular o célula, o incorporado a un compuesto químico, permite seguir su metabolismo, ruta patogénica o destino. Los marcadores pueden ser de tres clases: i) marcadores isotópicos, que pueden ser isótopos radiactivos o pesados; ii) inmunomarcadores, que pueden ser antígenos o anticuerpos; y iii) marcadores de color o fluorescencia.

Aquellos basados en la emisión de fluorescencia por proteínas fluorescentes (PF) utilizadas como marcadores delatores. Constituyen una herramienta imprescindible Este tipo de marcadores ha revolucionado el marcaje celular ya que permiten detectar marcadores proteicos in vivo, en un entorno celular natural y sin previa manipulación del tejido, en contraposición con los marcadores enzimáticos. Posibilitan el análisis de procesos dinámicos subcelulares y la localización subcelular de proteínas de interés. Además de la proteína verde fluorescente (GFP), se han obtenido diversos marcadores fluorescentes, también derivados de corales y anémonas.

En Fitopatología, se consideran fáciles de usar y normalmente sencillos de ejecutar, porque no exigen la realización de extractos, purificación de ácidos nucleicos, o tratamiento complejo de las muestras vegetales o de vectores, en su procesado antes del análisis de las mismas mediante técnicas de cultivo o aislamiento, serológicas, de hibridación o moleculares de amplificación.