Suero completo o fracción de inmunoglobulinas de la sangre de un animal inmunizado. Las inmunoglobulinas de un antisuero tienen un origen policlonal, pues son producidas por distintos linfocitos, en contraposición con el origen y la definición de anticuerpo monoclonal.
antisuero homólogo
Aquel obtenido de un antígeno determinado (patógeno específico) y que contiene anticuerpos que inicialmente reaccionarán contra él. Únicamente un máximo del 10 % de las inmunoglobulinas de un antisuero (anticuerpos policlonales) reaccionarán específicamente frente al antígeno inmunizante, el resto (gran mayoría) serán parte del patrimonio inmunitario del animal inmunizado, pero no reaccionarán frente al antígeno de interés. Por tanto, un antisuero homólogo garantiza reacción preferente frente al antígeno homólogo, pero no única debido a las frecuentes reacciones cruzadas con otros antígenos.
análisis serológico
Estudio químico y bioquímico de los sueros, especialmente del antisuero de animales inmunizados (antisuero), que incluye a los anticuerpos monoclonales específicos y anticuerpos recombinantes, y su uso para detectar, cuantificar o identificar antígenos o anticuerpos.
crioprotector
Distintas sustancias utilizadas en el proceso de crioconservación para reducir o eliminar los daños producidos por la congelación. Protegen del daño que se pueda producir en las células microbianas en el momento de la congelación. Existen diversos compuestos que se pueden utilizar como crioprotectores, pero el que se utiliza con más frecuencia es el glicerol, a una concentración del 15 al 20 %, incluso al 50 % para antisueros y diluciones de anticuerpos. También se utiliza, principalmente, el dimetilsulfóxido, la leche descremada y carbohidratos como glucosa, lactosa, sacarosa, inositol, entre otros productos. En su elección influye el tipo de microorganismo que se desee conservar.
ELISA indirecto, ELISA I
Variante de ELISA usada para detectar antígenos, establecer parentescos serológicos entre ellos o titular anticuerpos en diluciones seriadas. Sobre una microplaca o un inmunoadsorbente tapizado con antígeno (o muestra en la que desea verificar la presencia del antígeno de interés), se añaden los anticuerpos específicos del antígeno y tras incubación y lavado se añaden inmunoglobulinas anti la especie animal utilizada para obtener los anticuerpos específicos, marcadas con una enzima o biotiniladas Esta modalidad evita tener que preparar conjugados para cada anticuerpo específico y como quiera que las inmunoglobulinas anti especie son muy utilizadas en análisis clínicos, están disponibles comercialmente con una alta calidad contrastada. Las más usuales son las de cabra anticonejo para anticuerpos policlonales de antisueros o de cabra antirratón para anticuerpos monoclonales, marcadas con fosfatasa alcalina o peroxidasa.
glicerol
Propanotriol, líquido claro y espeso, componente importante de muchos lípidos. Es el producto de una vía metabólica secundaria de la glicolisis. Se usa mezclado con agua o alcohol como crioprotector o volumen a volumen para conservar antisueros, anticuerpos monoclonales o conjugados enzimáticos durante largos períodos de almacenamiento a 4 oC o a -20 oC (en este caso no se congela).
heterólogo
1. Compuesto de distintos elementos o de elementos similares en distintas proporciones. 2. Se aplica a todo aquello derivado o procedente de una especie distinta de la especie de referencia, como por ejemplo, células heterólogas, ADN heterólogo, tejido heterólogo, antisuero heterólogo.
inmunización
Técnica utilizada para inducir en animales experimentales de laboratorio, la síntesis de anticuerpos policlonales (antisueros), obtener linfocitos sensibilizados (para la obtención de anticuerpos monoclonales mediante la tecnología de hibridomas) o de anticuerpos recombinantes artificiales. Se logra mediante una serie de inyecciones inmunizantes (protocolo de inmunización) que suministra una dosis de antígeno cada cierto tiempo, según el protocolo de inmunización escogido. Los animales más utilizados en Fitopatología para la producción de antisueros son: conejo, cabra o caballo, y ratones para la obtención de anticuerpos monoclonales específicos.
inmunodifusión doble o de Ouchterlony
Modalidad de inmunodifusión en la que una serie de pocillos excavados en un medio gelosado (0,5 a 1,2 % de agar con azida sódica como preservativo) y que contienen distintas muestras o suspensiones de agentes patógenos cuyos antígenos solubles se desean comparar, rodean regularmente a un pocillo central desde el que se dispensan los anticuerpos (antisuero o anticuerpos monoclonales). Los contenidos de los pocillos migran unos hacia otros. Se efectúa en láminas portaobjetos de manera estándar o en placas de Petri cuyo gel se troquela con sacabocados o matrices de tubitos o cuchillas circulares con una configuración geométrica. El agar es extraído por succión al vacío y se dispensan las muestras de antígenos y en el pocillo central los anticuerpos. Se incuba en ambiente húmedo en recipientes o tanques de inmunodifusión apropiados y los anticuerpos difunden hacia los antígenos y viceversa. Cuando se produce la equivalencia precipitan en líneas de precipitado opaco, que una vez desecado el gel pueden teñirse para mejor observación. La unión de líneas de precipitado que se fusionan entre dos pocillos contiguos indica identidad o total homología antigénica entre el contenido de ambos pocillos que comparten los mismos epítopos. La aparición de líneas de precipitado que se cruzan indica no identidad entre el contenido de ambos pocillos ya que no comparten ningún epítopo. Si entre dos pocillos contiguos se produce una línea de precipitado común, pero se genera un espolón (cruce de una única línea), indica identidad parcial entre los epítopos de uno y otro pocillo, indicando que comparten epítopos pero no todos (identidad parcial). La no aparición de línea de precipitado en un pocillo y la aparición de línea de precipitado en el otro, indica ausencia total de identidad (antígenos heterólogos).
inmunoglobulina G, IgG
Glicoproteína globular del suero sanguíneo de animales inmunizados, que aparece tras las IgM en protocolos de inmunización experimental. Posee una mayor movilidad que las IgM hacia el cátodo durante la electroforesis. Constituye una clase distinta de anticuerpos. Su peso molecular es de unos 150 kDa. La IgG humana ha sido extensivamente estudiada y su estructura en bien conocida, fija el complemento y atraviesa la placenta. Representa la mayoría de anticuerpos presentes en el suero de animales inmunizados con protocolos largos de inmunización, por lo que es la predominante en antisueros comerciales.
sangría
Acción y efecto de sangrar un animal tras abrir o punzar una vena. Se efectúa en animales experimentales inmunizados para recolectar sangre que una vez coagulada contendrá en su suero (antisuero) anticuerpos frente al antígeno inmunizante. También se realiza para recolectar pequeñas cantidades de sangre para evaluar el título de anticuerpos, antes del sacrificio del animal.
serogrupo
Grupo de serotipos que poseen uno o más antígenos en común. Conjunto de microorganismos artificialmente agrupados por su reacción frente a técnicas serológicas, que indican poseer las mismas características serológicas o muy similares (antígenos comunes). Ello se debe a poseer un estrecho parentesco serológico natural debido a su similar composición antigénica (epitópica). Un serogrupo es claramente diferenciable de otro distinto. Los serogrupos pueden establecerse mediante antisueros (implican a numerosos motivos antigénicos comunes) o con anticuerpos monoclonales específicos (implican únicamente a un motivo, determinante antigénico o epítopo común). Son muy útiles para establecer tasa o porcentaje de parentesco serológico entre especies de microorganismos. Se usan en diagnóstico, si además llevan asociada una característica distintiva de tipo biológico, patogénico, de transmisión, o ligada al huésped o anfitrión.
seroteca
Lugar del laboratorio donde se mantienen almacenadas, registradas y debidamente identificadas muestras o cantidades de antisueros, de anticuerpos monoclonales o de recombinantes, en condiciones de seguridad y habitualmente congeladas (-20 o -80 °C) con un crioprotector o mezcladas con glicerol bidestilado y estéril añadido volumen a volumen. También suelen mantenerse liofilizadas, conservándose en este caso a 4 °C en lugar seco y oscuro.
suero
Parte de la sangre o de la linfa que permanece líquida después de haberse producido la coagulación. Líquido que queda al coagularse la sangre a temperatura ambiente o tras centrifugación de la sangre coagulada. Está constituido por el plasma, menos los factores de coagulación sanguínea. Si procede de animales inmunizados, se denomina antisuero, y contendrá un título interesante de anticuerpos frente al antígeno utilizado en la inmunización, que permitirá su uso mediante técnicas serológicas de detección, diagnóstico o identificación.
suero hiperinmune
Antisuero que contiene un alto título de anticuerpos específicos de interés, debido a la inmunización experimental repetida en un animal de laboratorio, en el que aproximadamente el 10 % de las inmunoglobulinas totales del animal inmunizado, serán anticuerpos específicos. El animal así inmunizado (generalmente conejo) puede utilizarse para producción de antisuero (anticuerpos policlonales) o para la producción de anticuerpos monoclonales específicos (utilizando linfocitos de ratón o rata inmunizados).
suero salino
Solución isotónica con fluidos del cuerpo de animales experimentales, generalmente 0, 85-0,9 % de NaCl en agua tamponada a pH 7,2-7,4. Se utiliza estéril para diluir antisueros o sobrenadantes de hibridomas segregantes de anticuerpos monoclonales específicos, cultivados in vitro. Generalmente es sustituido por agua fisiológica tamponada (AFT) o por tampón fosfato salino tamponado (PBS), a similar pH.
título
1. Dilución máxima de un antisuero, fluido ascítico de ratón, solución de inmunoglobulinas purificadas o anticuerpos recombinantes, que es capaz de reaccionar con una cantidad concreta de antígeno, mediante una técnica serológica determinada. 2. En ocasiones, se utiliza como sinónimo de carga viral o carga microbiológica.
anticuerpo
Proteína nueva o alterada (molécula de inmunoglobulina del suero) producida por los linfocitos B de la sangre de un animal, en respuesta a un estímulo antigénico (sustancia extraña); reacciona uniéndose específicamente con el antígeno o hapteno que lo indujo, para neutralizarlo o bloquearlo. Los anticuerpos pueden causar lisis, aglutinación o precipitación del antígeno.
anticuerpo monoclonal, AM
Aquel producido por la tecnología de hibridomas desarrollada por Georges Khöler y César Milstein (1975), mediante el cultivo de un solo tipo de células híbridas entre un linfocito B de un animal inmunizado y células de mieloma de crecimiento continuo in vitro. Por tanto, está constituido por una sola especie o isotipo de inmunoglobulina, que proviene de un único clon, es totalmente específico del epítopo que lo originó y homogéneo. Los hibridomas productores de anticuerpos pueden mantenerse indefinidamente congelados en nitrógeno líquido ya que los anticuerpos segregados en cultivo in vitro, mantienen sus características en el tiempo.