Diccionario

Proteína nueva o alterada (molécula de inmunoglobulina del suero) producida por los linfocitos B de la sangre de un animal, en respuesta a un estímulo antigénico (sustancia extraña); reacciona uniéndose específicamente con el antígeno o hapteno que lo indujo, para neutralizarlo o bloquearlo. Los anticuerpos pueden causar lisis, aglutinación o precipitación del antígeno.

Aquel obtenido por recombinación de genes de anticuerpos de distinto origen (como: humano y murino), de modo que posee características estructurales de ambos.

Aquel producido por la tecnología de hibridomas desarrollada por Georges Khöler y César Milstein (1975), mediante el cultivo de un solo tipo de células híbridas entre un linfocito B de un animal inmunizado y células de mieloma de crecimiento continuo in vitro. Por tanto, está constituido por una sola especie o isotipo de inmunoglobulina, que proviene de un único clon, es totalmente específico del epítopo que lo originó y homogéneo. Los hibridomas productores de anticuerpos pueden mantenerse indefinidamente congelados en nitrógeno líquido ya que los anticuerpos segregados en cultivo in vitro, mantienen sus características en el tiempo.

Aquel anticuerpo capaz de inhibir la infectividad viral en un extracto vegetal bruto o semipurificado.

Cualquier molécula, expresada en un sistema heterólogo, que sea capaz de reconocer o unirse específicamente a epítopos en moléculas antigénicas, o no. Son sintéticos, producidos por técnicas de ingeniería genética y constituidos por fragmentos de anticuerpo producidos al expresar genes de anticuerpo en fagos, bacterias, levaduras, o plantas transgénicas. Su producción no precisa animales inmunizados, pues se basa en genotecas sintéticas, aunque pueden obtenerse de genotecas de linfocitos B de animales inmunizados o de hibridomas. Normalmente están formados por el fragmento variable (scFv, del inglés single chain variable fragment) de la cadena pesada y ligera de una inmunoglobulina (responsables del reconocimiento del antígeno) unidas por un péptido sintético que trata de reproducir su posición espacial apta para reconocer epítopos. Se suelen estabilizar con cremalleras de leucina y dominios y pueden constituir conjugados sintéticos al llevar enzimas como producto de fusión. Su expresión en plantas transgénicas puede inmunomodular la infección y conferir artificialmente resistencia mediante los denominados fitoanticuerpos.

Técnica de interés en Fitopatología para la generación de genotecas combinatorias de anticuerpos (repertorios de genes V murinos o humanos), que han sido generadas mediante la técnica de despliegue en fagos filamentosos o en bacterias.

Variante de ELISA DAS (doble sándwich de anticuerpos) combinada con el sistema de revelado de ELISA indirecto. Se realizan los mismos pasos, pero requiere producir anticuerpos específicos en dos especies animales distintas. Se evita realizar conjugados al revelar la reacción con anticuerpos específicos (como los empleados en la fase primera de tapizado) y tras incubación y lavado se añaden inmunoglobulinas anti la especie animal utilizada para generar los anticuerpos específicos frente al patógeno de interés, pero conjugados, con una enzima. Se suele utilizar con anticuerpos policlonales de conejo en la fase de tapizado y anticuerpos monoclonales específicos de ratón, y revelar con inmunoglobulinas de cabra antirratón conjugadas con una enzima (normalmente fosfatasa alcalina). La modalidad es muy sensible (capaz de detectar del orden de 0,05-0,1 g de antígeno), pues permite amplificar la reacción con la adición de inmunoglobulinas anti especie marcadas.

Variante de ELISA muy sensible para detección de antígenos complejos (agentes patógenos). De manera secuencial y mediada por etapas de incubación y lavado, se tapizan los pocillos de una microplaca o la superficie de un inmunoadsorbente con anticuerpos purificados específicos del agente patógeno a detectar, se añade la muestra (extracto bruto vegetal, suspensión bacteriana, dilacerado, exudados, lloros de vid, extracto de suelo filtrado, etc.), y se añaden los mismos anticuerpos que en la primera etapa, pero conjugados con una enzima (habitualmente fosfatasa alcalina). La reacción se revela con el substrato específico de la enzima marcadora (habitualmente p-nitrofenil fosfato) que por hidrólisis y efecto batocrómico producirá un color amarillo (valor ELISA a 405 nm) de intensidad proporcional a la enzima retenida. La reacción clásica y más sensible, se realiza añadiendo 200 L/pocillo de la microplaca en cada etapa, aunque para ahorro de reactivos y economía algunos kits comerciales utilizan solo 100 L/pocillo. Otras modalidades utilizan únicamente unos microlitros Los anticuerpos utilizados para tapizar o como conjugados pueden ser producidos en la misma especie animal o no. Frecuentemente se utilizan anticuerpos policlonales para tapizado y monoclonales específicos (solos o en mezcla de varios) como conjugados, o ELISA basado completamente en anticuerpos policlonales, en anticuerpos monoclonales o recombinantes de anticuerpos monoclonales, que confieren alta especificidad y sensibilidad. DAS es la modalidad más popular de ELISA para detección de agentes patógenos o sus metabolitos.

Acrónimo del inglés. Denominación en desuso.

Anticuerpo de origen humano o de otro mamífero (generalmente ratón) sintetizado por una planta transgénica, con fines de inmunomodulación de la infección o de producción económica de anticuerpos en plantas factoría.

Repertorios de genes variables de anticuerpos (V) murinos o humanos que han sido generadas mediante la técnica de despliegue en fagos filamentosos o en bacterias. Son utilizadas para generar anticuerpos recombinantes y fitoanticuerpos.

1. Acción de absorber. 2. En serología e inmunología, unión pasiva e inespecífica de anticuerpos o antígenos al vidrio, plástico, nitrocelulosa, u otras superficies. 3. Uso de un antígeno o anticuerpo para eliminar o reducir la concentración de anticuerpos o antígenos, respectivamente, de una mezcla. Se puede realizar en líquido o con antígenos o anticuerpos inmovilizados en una fase sólida. 4. Reducción de la fuerza de una onda electromagnética que se propaga a través de un medio, determinada por las condiciones dieléctricas del material.

1. Acción y efecto de adsorber. 2. Proceso de atracción de las moléculas o iones de una sustancia en la superficie de otra, siendo el tipo más frecuente el de la adhesión de líquidos y gases en la superficie de los sólidos mediante enlaces químicos o físicos y la de proteínas como los anticuerpos o antígenos en la superficie de placas o tubos ELISA, normalmente de poliestireno, durante su sensibilización o tapizado.

1. Proximidad, analogía, compatibilidad o semejanza de una cosa a otra. 2. Grado de reactividad de un compuesto o grupo funcional con un reactivo dado. Se utiliza en relación con la interacción específica que se produce entre una enzima y su sustrato o bien entre un anticuerpo y un antígeno.

Polisacárido que se extrae y purifica de algunas algas marinas (rodofíceas). Es utilizado para la solidificación de medios de cultivo o de sustratos para inmunodifusión de antígenos y anticuerpos.

Formación de coágulos o flóculos de antígenos, debidos a la reacción de determinantes antigénicos de superficie de la célula o partícula, con anticuerpos específicos. Técnica serológica rápida y sencilla, que no precisa de preparación previa de la muestra. Se realiza en portaobjetos o placas especiales con pocillos redondeados, posee mediana sensibilidad y precisa de elevadas cantidades de anticuerpos por lo que ha caído en desuso.

Tipo de técnica serológica de aglutinación en la que los antígenos o los anticuerpos están marcados con látex, bentonita o metales en estado coloidal, con el fin de facilitar la formación de flóculos detectables a simple vista o bajo lupa binocular. Es más sensible que la aglutinación simple y se aplicó extensivamente para la detección de virus de la patata o papa en programas de certificación, antes de la puesta a punto de la técnica ELISA.

1. Resultado positivo en una prueba serológica de aglutinación, en la que antígenos y anticuerpos se unen o reconocen formando grumos visibles. Indica la presencia de anticuerpos específicos contra un antígeno en la muestra analizada. 2. Se aplica a estructuras pegadas entre sí, pero no fusionadas, como ocurre con algunas esporas de Acremonium y Fusarium, que se mantienen unidas mediante un mucílago.

Técnica microbiológica basada en la concentración de células bacterianas mediante partículas magnéticas sensibilizadas con anticuerpos específicos, que son recolectadas con un imán tras incubación, antes de ser sembradas en una placa con medio sólido. El método permite detectar las células bacterianas viables que se han multiplicado en el medio de cultivo formando colonias.

Técnica que se basa en la realización de diluciones sucesivas de una suspensión celular, hasta conseguir una alícuota que contenga una sola célula. Se utiliza fundamentalmente en la obtención de anticuerpos monoclonales y en otros procesos de obtención de cultivos o líneas puras.

Técnica inmunológica de determinación cuantitativa de antígenos o anticuerpos mediante el uso de reactivos marcados con isótopos radiactivos.

Estudio químico y bioquímico de los sueros, especialmente del antisuero de animales inmunizados (antisuero), que incluye a los anticuerpos monoclonales específicos y anticuerpos recombinantes, y su uso para detectar, cuantificar o identificar antígenos o anticuerpos.

1. Cualquier sustancia que, al ingresar en un organismo inmunocompetente, estimula la producción de una o varias series de anticuerpos específicos que se unen a ella a través de unos sitios denominados epítopos o determinantes antigénicos. Un mismo antígeno puede contener múltiples epítopos, algunos de los cuales pueden estar repetidos, y cada epítopo es específico de un anticuerpo. Todos los inmunógenos son antigénicos, pero no todos los inmunógenos son immunogénicos La capacidad de un antígeno para reaccionar específicamente con un anticuerpo se denomina reactividad antigénica. 2. Cualquier sustancia que es capaz de unirse de forma específica a un anticuerpo o a un receptor localizado en la superficie de los linfocitos T. Los antígenos que se unen a anticuerpos son de naturaleza extremadamente diversa (pueden ser desde sustancias relativamente sencillas, como los lípidos y las hormonas, hasta macromoléculas más complejas, como los ácidos nucleicos y las proteínas, e incluso virus o un fragmento de célula, por citar unos ejemplos); en cambio, los que se unen con el receptor de superficie de los linfocitos T son únicamente de naturaleza proteínica.

Antígeno específico y común o conservado en un cierto grupo de virus. Con el mismo se pueden preparar anticuerpos monoclonales o recombinantes totalmente específicos del grupo de virus determinado. Se han localizado en numerosos grupos de virus antígenos específicos de grupo, como un anticuerpo monoclonal (PTY 1) que reconoce a un mayoritario grupo de potivirus transmitidos por pulgón, o aquel anticuerpo monoclonal (MCA13) que reacciona básicamente con aislados agresivos del virus de la tristeza de los cítricos (Closterovirus tristezae, Citrus tristeza virus-CTV).

Antígeno específico y muy conservado en ciertos tipos de virus. Con el mismo se pueden preparar anticuerpos monoclonales o recombinantes totalmente específicos del tipo de virus concreto, como aquellos 4DG11, que reaccionan contra aislados Dideron (D) del virus de la viruela del ciruelo (Potyvirus plumpoxi, Plum pox virus-PPV) o sharka tipo D, o el anticuerpo monoclonal AL, que reacciona frente a tipos agresivos Marcus de PPV-M o aquellos específicos de otros tipos de PPV.

Aquel que forma parte de la estructura del agente patógeno. En el caso más sencillo, el de los virus, la cápsida o cubierta proteica, es el más usual. Normalmente contiene un solo tipo de proteína en forma de subunidades repetitivas, pero en algunos casos puede poseer hasta siete proteínas diferentes. En bacterias, hongos, oomicetos y nematodos, hay numerosos antígenos estructurales, que pueden ser purificados y utilizados para generar distintos tipos de anticuerpos.

Aquel de las cápsulas y capas mucilaginosas bacterianas, frecuentemente de naturaleza glicoproteica. Distintas cepas de una misma especie pueden poseer antígenos capsulares diferentes en composición química y por tanto los anticuerpos generados frente al antígeno K pueden tener valor para la identificación serológica específica, como en Ralstonia solanacearum.

Aquel obtenido mediante técnicas de ingeniería genética y que es capaz de inducir la síntesis de anticuerpos en un animal inmunizado, o de ser efectivo en seleccionar anticuerpos recombinantes. Además, debe de ser reconocido mediante la reacción antígeno-anticuerpo in vitro. Poseen interés si son muy similares a los antígenos nativos, aunque frecuentemente sufren cambios en sus epítopos que no les permite ser reconocidos por anticuerpos generados con antígenos nativos o no desnaturalizados.

Aquel que es capaz de migrar en un medio gelosado y se combinan con anticuerpos solubles en presencia de un electrolito a una temperatura y pH adecuados para formar un complejo visible insoluble o precipitado (reacción de precipitación). Se utiliza para la determinación cualitativa y cuantitativa de antígenos y anticuerpos.

Suero completo o fracción de inmunoglobulinas de la sangre de un animal inmunizado. Las inmunoglobulinas de un antisuero tienen un origen policlonal, pues son producidas por distintos linfocitos, en contraposición con el origen y la definición de anticuerpo monoclonal.

Aquel obtenido de un antígeno determinado (patógeno específico) y que contiene anticuerpos que inicialmente reaccionarán contra él. Únicamente un máximo del 10 % de las inmunoglobulinas de un antisuero (anticuerpos policlonales) reaccionarán específicamente frente al antígeno inmunizante, el resto (gran mayoría) serán parte del patrimonio inmunitario del animal inmunizado, pero no reaccionarán frente al antígeno de interés. Por tanto, un antisuero homólogo garantiza reacción preferente frente al antígeno homólogo, pero no única debido a las frecuentes reacciones cruzadas con otros antígenos.

1. Que combate los virus. 2. Producto químico específico que se utiliza en el tratamiento de plantas o explantos cultivados in vitro, como 1-β-d-ribofuranosil-1,2,4-triazol-3-carboxamida (ribavirin), 2-tiouracilo, citosina, 1-β-d-arabino-furanósido-HCl (Ara-C), 8-azaguanina, 5-fluorodeoxiuridina (FudR), etc., con la finalidad de disminuir la carga viral y así aumentar las posibilidades de obtener material sano mediante cultivo de tejidos. 3. Resistencia conferida en plantas transgénicas mediante la expresión citosólica de fragmentos de anticuerpo contra la replicasa viral u otras construcciones generadas por ingeniería genética, con el fin de modular o impedir la infección.

Organización sin ánimo de lucro (https://www.european-virus-archive.com) que involucra una red global con experiencia en virología animal, humana y vegetal, y está compuesta actualmente por 38 laboratorios asociados ubicados tanto en los estados miembros de la Unión Europea (UE) como en terceros países. EVA-Global, como parte del programa de investigación e innovación Horizonte 2020 de la UE, está concebido como una entidad de acceso abierto cuyo objetivo es desarrollar sinergias y capacidades complementarias para ofrecer un acceso mejorado a investigadores e industrias. El catálogo en línea (https://www.european-virus-archive.com/evag-portal) proporciona acceso sencillo para el usuario final a las colecciones, que incluyen virus, materiales derivados, servicios y células modificadas. El consorcio garantiza que los materiales disponibles cumplan con los más altos estándares científicos en cuanto a seguridad, calidad y caracterización. Aunque la propiedad de los materiales proporcionados siga perteneciendo a los obtentores originales, una financiación específica de la UE ofrece la opción de acceso gratuito a los recursos virales para instituciones públicas de investigación. Además del material viral, también están disponibles anticuerpos, ensayos de detección mediante amplificación molecular, metodologías de vanguardia para el cultivo, preservación y análisis de virus. Todos los socios acordaron implementar un sistema de gestión de calidad. La gran cantidad de virus y aislados distintos de la colección permite implantar un concepto de preparación que ha sido beneficioso para investigadores de todo el mundo durante la pandemia de SARS-CoV-2. Asimismo, EVA-Global contribuye a la preservación de la biodiversidad de los virus.

Sigla del inglés. En español, Colección Americana de Cultivos Tipo. Alberga una amplia colección de microorganismos de referencia disponibles bajo petición, suministro de permisos oficiales de importación y pago de tasas. Es muy útil para comparaciones, validaciones y controles con fines de detección, diagnóstico e identificación. Mantiene en cultivo hibridomas segregantes de anticuerpos monoclonales de interés fitopatológico, que cede para uso científico.

Bacteriófago o fago es un término general para denominar a virus aislados de bacterias; algunos autores también utilizan el término para denominar a virus que infectan a arqueas, aunque esta acepción es controvertida. Su cápsida puede ser icosaédrica, constar de cabeza-cola, ser de tipo bastoncillo (filamentosa), o de otros tipos, y sus genomas constar de ADN o ARN y contener un número muy variable de genes. Se subdividen según sus propiedades bioquímicas o morfológicas. Un tipo de fago concreto suele infectar únicamente a una gama limitada de huéspedes o anfitriones sensibles. Infectan bacterias mediante inyección de su ácido nucleico en la célula anfitriona utilizando la maquinaria biológica de la bacteria para su reproducción. Hay dos tipos: líticos (bacteriófagos virulentos) y lisogénicos (bacteriófagos temperados), según que la infección produzca un cambio en el metabolismo bacteriano que lo lleve a la producción de nuevos bacteriófagos tras la lisis celular, o que el ADN vírico se inserte en el cromosoma bacteriano y se reproduzca con él, en forma de profago, sin destruir la célula bacteriana. Algunos se utilizan en el control biológico de bacterias fitopatógenas (también en medicina frente a bacterias multirresistentes a antibióticos), como vectores de clonación para insertar ADN dentro de las bacterias y obtener como resultado bibliotecas genómicas o genotecas de ADN recombinante (uno de los fagos más utilizados para este fin es el fago λ). Las genotecas combinatorias de anticuerpos se generan mediante la técnica de despliegue en fagos filamentosos o en bacterias. Los más importantes por sus aplicaciones biotecnológicas son el bacteriófago o fago λ (lambda), el fago 29 (phi29) y el bacteriófago M13 (que ha dado derivados fagémidos), muy utilizados como vectores de clonación.

Reactor, recipiente o incubadora empleado para llevar a cabo una reacción biológica, como el cultivo a gran escala de células u órganos vegetales, microorganismos o hibridomas segregantes de anticuerpos monoclonales en medio líquido. En algunos casos pueden servir como biosensores.

Dispositivo o instrumento de análisis que utiliza un elemento biológico de reconocimiento (anticuerpo, ácido nucleico, célula, enzima, orgánulo, tejido, receptor, ribozima, entre otros), o nanomateriales, (como nanopartículas o nanocompuestos), materiales inteligentes o compuestos biomiméticos (aptámeros, polímeros), como catalizadores o biorreceptores, para detectar o determinar un compuesto químico. El catalizador se encuentra a menudo inmovilizado en un soporte sólido y se utiliza conjuntamente con un instrumento fisicoquímico. Este instrumento sigue la transformación química de la sustancia a analizar por medio del catalizador inmovilizado, y después lo traduce a una señal eléctrica (generalmente por electrodos redox, electrodos selectivos de iones, sensores térmicos, contadores de fotones o fluorímetros, entre otros). Constan básicamente de tres elementos: el biorreceptor o catalizador, el transductor y el procesador de señal. Primero la muestra se une específicamente al biorreceptor (generalmente en Fitopatología, anticuerpo monoclonal o recombinante, ácido nucleico, glucano, lectina, enzima, tejido, célula entera, etc.); la señal que se genera es convertida por el transductor en un impulso químico, óptico, eléctrico o de otro tipo, que sea medible, y la identificación cualitativa y cuantitativa es procesada para ser leída por el procesador de datos. Se han diseñado biosensores desarrollados para la detección de algunos patógenos de plantas, incluso para varios simultáneamente, pero no han alcanzado todavía su utilización a escala comercial.

Tipo de biosensor en el cual el catalizador o biorreceptor está inmovilizado con un instrumento de detección, como un electrodo enzimático (en el que el catalizador es un enzima) o un electrodo biosonda (en el que el catalizador suelen ser anticuerpos monoclonales específicos o células intactas).

Cámara frigorífica o de incubación de microorganismos o células con una atmósfera interna de composición gaseosa distinta a la del ambiente. Generalmente mantiene una proporción alta de dióxido de carbono y baja en oxígeno, con el fin de ralentizar los procesos respiratorios de los vegetales o frutas almacenadas en su interior, o para favorecer el crecimiento de organismos anaerobios con fines de cultivo de los mismos, o para el mantenimiento y cultivo de líneas de hibridomas productores de anticuerpos monoclonales.

Instrumento que poseen un fondo subdividido en 9 cuadrados grandes de 1 mm2 cada uno, que permite estimar con precisión el número de células o en suspensión en un medio líquido, mediante una fórmula en la que una de las variables es el número observado. El cálculo de la concentración de células se puede expresar así: partículas/μL = (partículas contadas) / [(superficie contada (mm²) x profundidad de la cámara (mm)] x dilución. Muy usual en la producción de anticuerpos monoclonales y para conteo de esporas.

Aquella sobre la que se cultivan los tipos celulares de difícil crecimiento aisladamente. Se utilizan células nodriza (epiteliales o timocitos) del timo de ratón en algunas fases de la producción de anticuerpos monoclonales cuando se clonan y cultivan pocas células del hibridoma de interés, así como otras células en cultivo de tejidos vegetales, también se utilizan en la producción y mantenimiento de protoplastos y en la regeneración de plantas in vitro.

Inmovilización de agentes patógenos o de parte de sus constituyentes o metabolitos de forma específica o no, con fines de detección o identificación. Se realiza normalmente en el mismo soporte sólido en el que se realiza la reacción inmunológica, de hibridación o de amplificación molecular. Frecuentemente se efectúa por medio de anticuerpos específicos en el caso de inmunoelectromicroscopía.

La tumoral de crecimiento indefinido in vitro. Se emplea en la tecnología de hibridomas para la producción de anticuerpos monoclonales al ser fusionados con linfocitos de animales inmunizados. Las líneas comúnmente utilizadas en Patología vegetal proceden de ratón Balb/c.

Sustancia química que emite fluorescencia cuando se somete a una determinada radiación electromagnética o longitud de onda. Suelen utilizarse en microscopía de fluorescencia para la obtención de imágenes de células. La técnica es muy valiosa para la detección de bacterias, cromosomas, componentes celulares, reacciones o interacciones antígeno-anticuerpo en muestras vegetales o en sus extractos in vitro. Los más utilizados son rodamina B e isotiocianato de fluoresceína (FITC).

Anticuerpo, antígeno, sustancia inerte, metal, proteína o agente patógeno marcado con enzimas (normalmente fosfatasa alcalina o peroxidasa), biotina, avidina o estreptavidina, isotiocianato de fluoresceína u otros fluorocromos, proteína verde fluorescente, oro coloidal, hierro o cualquier elemento, compuesto o sustancia que le confiera nuevas propiedades delatoras. El objetivo del marcado es facilitar la detección o cuantificación de un organismo o compuesto tras producirse la reacción antígeno-anticuerpo, su multiplicación en una colonia o la infección en una planta convencional o transgénica.

Motivo estructural supersecundario de proteínas que crea fuerzas de adhesión a través de hélices alfa en paralelo. Es un dominio de dimerización común en proteínas involucradas en la expresión génica. Se introduce en los fragmentos de anticuerpos recombinantes artificiales (minianticuerpos, scFvs) para dimerizarlos y simular anticuerpos biespecíficos, aunque sean artificiales.

Distintas sustancias utilizadas en el proceso de crioconservación para reducir o eliminar los daños producidos por la congelación. Protegen del daño que se pueda producir en las células microbianas en el momento de la congelación. Existen diversos compuestos que se pueden utilizar como crioprotectores, pero el que se utiliza con más frecuencia es el glicerol, a una concentración del 15 al 20 %, incluso al 50 % para antisueros y diluciones de anticuerpos. También se utiliza, principalmente, el dimetilsulfóxido, la leche descremada y carbohidratos como glucosa, lactosa, sacarosa, inositol, entre otros productos. En su elección influye el tipo de microorganismo que se desee conservar.

Determinante o sitio antigénico escondido o no disponible para reaccionar con un anticuerpo, hasta que no sucedan cambios estructurales en la molécula que lo hagan accesible a los anticuerpos.