Diccionario

Traspaso de fragmentos de ADN, de moléculas de ARN o de proteína, del gel de electroforesis a una membrana de filtro por capilaridad o electroforesis.

Revelado inmunológico realizado sobre aquellos antígenos previamente separados electroforéticamente en un gel y posteriormente electrotransferidos a una membrana. Básicamente consiste en realizar una transferencia tipo Western y un posterior revelado mediante técnicas inmunoenzimáticas ELISA en un soporte sólido (generalmente membrana o gel).

Esteroide que se encuentra exclusivamente en las flores y las hojas de las especies Digitalis purpurea, D. orientalis y D. lanata. Es un hapteno que se utiliza frecuentemente como molécula señal o marcador en inmunología e hibridación molecular, para el revelado de reacciones como otros marcadores (biotina o fluoresceína). Habitualmente, la digoxigenina se introduce químicamente por conjugación, en biomoléculas (proteínas, anticuerpos, ácidos nucleicos) para ser detectados en ensayos adicionales. Son muy populares los anticuerpos anti-digoxigenina, ya que se utilizan en una extensa gama de ensayos inmunológicos como ELISA, electrotransferencias, etc. e hibridaciones moleculares e hibridación in situ y confieren gran sensibilidad a la reacción. De hecho, el uso de precursores no radiactivos para marcar ácidos nucleicos ha hecho a la hibridación molecular más accesible. El precursor no radioactivo más utilizado son los derivados de la molécula DIG, que está unido a través de un brazo espaciador (once residuos de carbono) a uridín-nucleótidos, y se incorpora enzimáticamente en los ácidos nucleicos mediante métodos estándar.

Enzima que cataliza la hidrólisis de ésteres de fosfato. Se utiliza para diversos protocolos experimentales, que incluyen, entre otros, la eliminación de grupos fosfatos de moléculas de ADN (para evitar la religación de vectores en un experimento de clonación, por ejemplo) y técnicas inmunológicas. La enzima procedente de la mucosa intestinal de ternera es la más utilizada en la técnica ELISA en Fitopatología y en inmunodetección en general, para marcar anticuerpos y proteína A. Su sustrato soluble es el p-nitrofenil fosfato en dietanolamina a pH 9,8. Su hidrólisis produce una coloración amarilla muy intensa en disolución alcalina, cuantificable espectrofotométricamente a 405 nm. Si se utiliza un sustrato cromogénico precipitante de cloruro de nitroblue tetrazolio (nitroazul de tetrazolio) o NBT con 5-bromo 4-cloro 3-indolil fosfato (BCIP), produce precipitados color azul oscuro a púrpura. Es muy utilizado para localización de patógenos (especialmente de virus) por inmunodetección (inmunohistoquímica e inmunoimpresión-ELISA) y en inmunoelectrotransferencia. Ambos sustratos están disponibles comercialmente en forma de pastillas para su disolución en agua.

Denominación común de la técnica analítica utilizada para identificar proteínas específicas en una mezcla compleja de proteínas, como la que se presenta en extractos celulares o de tejidos vegetales. La técnica tiene tres etapas: i) separación por tamaño generalmente en un gel de poliacrilamida; ii) transferencia por difusión simple, por vacío o electroforesis a un soporte sólido (membrana de nitrocelulosa, éster de celulosa, o generalmente fluoruro de polivinilideno o PVDF) y, finalmente; iii) visualización colorimétrica mediante ELISA directo o indirecto, con el uso de anticuerpos específicos marcados usualmente con fosfatasa alcalina, o anticuerpos específicos y antiespecie conjugados y un sustrato apropiado. También se puede realizar el revelado mediante quimioluminiscencia, fluorescencia, o radiactividad. Se han diseñado aparatos que permiten la electrotransferencia simultánea a varias membranas, con objeto de revelar las distintas copias con diferentes anticuerpos específicos. Están disponibles comercialmente membranas de nitrocelulosa o fluoruro de polivinilideno, polifluoruro de vinilideno o polivinilideno fluoruro (PVDF) precortadas, compatibles con la mayoría de aparatos de electrotransferencia.

Vocablo inglés, frecuentemente utilizado en español para referirse a inmunoelectrotransferencia de proteínas separadas en un gel e inmovilizadas en una membrana.

1. Traspaso de fragmentos de ADN o de moléculas de ARN o de proteína de un gel de electroforesis a un filtro de membrana por simple capilaridad o por electroforesis. 2. (transfer). Movimiento o traslado programado de un agente biológico de una instalación a otra.