Diccionario

Producto empleado para desgastar o producir pequeñas lesiones en la superficie foliar de plantas indicadoras, generalmente herbáceas, cuando se realizan inoculaciones mecánicas de virus, viroides y otros patógenos transmisibles por esta vía. Habitualmente se utiliza carborundo (carburo de silicio) que se pulveriza sobre la superficie a inocular y seguidamente se aplica el inóculo, que frecuentemente es un extracto bruto de la planta infectada, una solución de virus purificado o un concentrado de virus semipurificado, adicionado con carbón activado.

Variante de ELISA muy sensible para detección de antígenos complejos (agentes patógenos). De manera secuencial y mediada por etapas de incubación y lavado, se tapizan los pocillos de una microplaca o la superficie de un inmunoadsorbente con anticuerpos purificados específicos del agente patógeno a detectar, se añade la muestra (extracto bruto vegetal, suspensión bacteriana, dilacerado, exudados, lloros de vid, extracto de suelo filtrado, etc.), y se añaden los mismos anticuerpos que en la primera etapa, pero conjugados con una enzima (habitualmente fosfatasa alcalina). La reacción se revela con el substrato específico de la enzima marcadora (habitualmente p-nitrofenil fosfato) que por hidrólisis y efecto batocrómico producirá un color amarillo (valor ELISA a 405 nm) de intensidad proporcional a la enzima retenida. La reacción clásica y más sensible, se realiza añadiendo 200 L/pocillo de la microplaca en cada etapa, aunque para ahorro de reactivos y economía algunos kits comerciales utilizan solo 100 L/pocillo. Otras modalidades utilizan únicamente unos microlitros Los anticuerpos utilizados para tapizar o como conjugados pueden ser producidos en la misma especie animal o no. Frecuentemente se utilizan anticuerpos policlonales para tapizado y monoclonales específicos (solos o en mezcla de varios) como conjugados, o ELISA basado completamente en anticuerpos policlonales, en anticuerpos monoclonales o recombinantes de anticuerpos monoclonales, que confieren alta especificidad y sensibilidad. DAS es la modalidad más popular de ELISA para detección de agentes patógenos o sus metabolitos.

Resultado del efecto de disgregar, triturar o hacer homogéneas muestras biológicas en presencia de un tampón apropiado. La misión del tampón es evitar oxidaciones y mantener las dianas de interés de la muestra en condiciones que eviten su desnaturalización o degradación. Puede ser preparativo para realizar posteriores purificaciones o concentraciones del extracto, o definitivo si se utiliza directamente para detección o diagnóstico como un extracto bruto.

1. Uso de anticuerpos específicos para sensibilizar o tapizar tubos en la reacción en cadena de la polimerasa (PCR o RT-PCR) con el fin de enriquecer en los patógenos de interés aquellos presentes en el extracto bruto de la muestra, en una fase previa a su detección. Requiere la obtención de extractos, pero evita la purificación de ácidos nucleicos de la muestra. Consiste en varias etapas: i) concentración de viriones o de células de cualquier otro patógeno presentes en el extracto vegetal por captura en las paredes de los tubos de PCR tapizados con anticuerpos específicos; ii) eliminación por sucesivos lavados de los restos del extracto vegetal e inhibidores no inmunocapturados; iii) realización de la reacción de amplificación en el mismo tubo. Los ácidos nucleicos del patógeno a detectar son liberados por el calor de la reacción. El método mejora la sensibilidad de la PCR o RT-PCR simple convencional, además de reducir inhibidores de los extractos vegetales y constituye un método sencillo y económico de preparación de muestras para amplificación, aunque su sensibilidad y sencillez ha sido muy superada por otras versiones de PCR. 2. (trapping). Tapizado o sensibilización con anticuerpos específicos de rejillas de microscopía electrónica con el fin de atrapar selectivamente partículas virales, células bacterianas o fúngicas presentes en la muestra depositada en la rejilla.

Método de introducción de inóculo o diseminación, generalmente artificial o experimental de un patógeno en un huésped apropiado, mediante la manipulación humana acompañada por rotura física de tejidos de la planta. Puede ocurrir naturalmente en campo por roce de ramas (que en ocasiones llegan a soldarse) u hojas por viento, o por contacto de raíces entre plantas infectadas y sanas o por agentes patógenos (generalmente virus transmisibles por contacto), o por organismos patógenos presentes en la cubierta seminal o albumen de la semilla, que lo transmiten a la plántula en la germinación. La transmisión experimental se efectúa sobre el haz de hojas, estípulas u hojas cotiledonares de plantas generalmente herbáceas. La superficie a inocular previamente se espolvorea con carborundo u otro abrasivo para causar heridas superficiales por el posterior frote suave con una solución o extracto bruto de la planta infectada. Inmediatamente se lava la superficie inoculada para eliminar inhibidores y se cultivan las plantas inoculadas en condiciones apropiadas para la óptima manifestación de síntomas durante el tiempo necesario para cada patógeno, variable en días para diferentes virus.

Denominación común del método serológico de inmunodifusión simple, radial o de Mancini, pero en tubo. En este método, la muestra (solución de antígeno o extracto bruto o clarificado de una planta infectada) se coloca en un tubo de ensayo que contiene anticuerpos específicos mezclados con agar antes de que solidifique. Los antígenos de la muestra, caso de contener el patógeno homólogo a los anticuerpos utilizados, difundirán dentro del agar y formarán un precipitado o banda al llegar a la equivalencia. Técnica en desuso ante otras posibilidades de mayor sensibilidad analítica y que requieren menor consumo de anticuerpos.

Preparación de material biológico en el cual se han homogenizado tejidos en presencia de un tampón, fraccionando células y eliminando, habitualmente por filtración por gasa o ligera centrifugación, los desechos celulares más groseros, pero sin mayor purificación de la muestra homogeneizada.