Diccionario

Indicador común.

Indicador usado comúnmente en experimentos bioquímicos para indicar especialmente la respiración celular y diferenciar tejidos metabólicamente activos de aquellos metabólicamente inactivos, principalmente en viabilidad de semillas. Se usa también en medios de cultivo. Las células vivas lo reducen enzimáticamente a 1, 3, 5-trifenilformazán, de color rojo en tejidos vivos debido a la actividad de varias deshidrogenasas, enzimas importantes en la oxidación de compuestos orgánicos y del metabolismo celular. En zonas de necrosis o de tejidos muertos, el indicador conserva su color blanco o incoloro, debido a que las enzimas han sido desnaturalizadas o degradadas.

Prueba bioquímica rápida para determinar la viabilidad de semillas. Se hidratan las semillas para generar su actividad fisiológica de respiración y se lavan con una solución de 2, 3, 5 trifenil tetrazolio. Las células vivas adquieren un color rojizo, lo cual indicará la capacidad potencial de germinación de la semilla. Las semillas muertas (inviables) no se tiñen.

Enzima que cataliza la hidrólisis de ésteres de fosfato. Se utiliza para diversos protocolos experimentales, que incluyen, entre otros, la eliminación de grupos fosfatos de moléculas de ADN (para evitar la religación de vectores en un experimento de clonación, por ejemplo) y técnicas inmunológicas. La enzima procedente de la mucosa intestinal de ternera es la más utilizada en la técnica ELISA en Fitopatología y en inmunodetección en general, para marcar anticuerpos y proteína A. Su sustrato soluble es el p-nitrofenil fosfato en dietanolamina a pH 9,8. Su hidrólisis produce una coloración amarilla muy intensa en disolución alcalina, cuantificable espectrofotométricamente a 405 nm. Si se utiliza un sustrato cromogénico precipitante de cloruro de nitroblue tetrazolio (nitroazul de tetrazolio) o NBT con 5-bromo 4-cloro 3-indolil fosfato (BCIP), produce precipitados color azul oscuro a púrpura. Es muy utilizado para localización de patógenos (especialmente de virus) por inmunodetección (inmunohistoquímica e inmunoimpresión-ELISA) y en inmunoelectrotransferencia. Ambos sustratos están disponibles comercialmente en forma de pastillas para su disolución en agua.

Técnica serológica de localización de antígenos en secciones de tejido inmovilizadas o impresas en membranas de nitrocelulosa, éster de celulosa o papel. Las secciones de tejido de material vegetal recién cortado se impresionan contra la membrana suave pero firmemente, de manera que se permita la observación de la estructura de la sección. Las huellas o improntas de tejido inmovilizadas se revelan como en una técnica ELISA, frecuentemente directa, con el uso de anticuerpos específicos conjugados con la enzima fosfatasa alcalina. El revelado se realiza con substrato precipitante azul nitrotetrazolio (o cloruro de tetrazolio nitroazul) y 5-bromo-4-cloro indolil fosfato (NBT+BCIP). La presencia de acúmulos de precipitado violeta en la zona vascular indica infección para patógenos vasculares y acúmulos en otras zonas indican la presencia localizada de otros patógenos extracelulares, en función de los anticuerpos utilizados. Es extensivamente empleada en viveros y prospecciones para la detección rutinaria de Closterovirus tristezae (Citrus tristeza virus-CTV), pues es la técnica serológica de referencia usada con anticuerpos monoclonales específicos. La realización de la prueba es sencilla, no requiere de personal especializado para su ejecución que puede efectuarse en condiciones de campo de forma muy económica.

En microscopía, aquel utilizado para rellenar la muestra o espécimen entre el portaobjetos (en la cual ya está fijada) y el cubreobjetos. Su misión es proteger la muestra o especialmente la delicada sección de tejidos, y suministrar un campo óptico claro. Existe una amplia gama disponible comercialmente, entre los más frecuentemente utilizados, están: Bálsamo del Canadá (actualmente en desuso debido a su alto coste y que se endurece y amarillea con los años), Permout (idóneo por su versatilidad), Merkoglass-EM Glass (apropiado en general y muy utilizado para tinciones con azul nitrotetrazolio-NBT), BioMount (muy utilizado para reacciones con anticuerpos marcados con oro coloidal), Euparal (útil si el tejido, la tinción o la matriz no toleran el xileno, usual en muchas técnicas de inmunolocalización), Gel/Mount (útil en inmunolocalización fluorescente o criosección en fresco), gelatina de glicerina, medio de goma arábiga y glicerol/PBS (muy comunes para muestras frescas), Vaspar (mezcla de vaselina y parafina fundida 1:1) y barniz pintauñas, utilizados estos dos últimos para sellar los bordes de cubreobjetos y evitar evaporación.

1. Sustancia o material nutritivo en la que vive un organismo o de la que obtiene nutrientes. Material, sintético o natural, que constituye el medio de cultivo de microorganismos o de cultivos vegetales in vitro. 2. Sustancia sobre la que actúa una enzima. En detección se utilizan sustratos solubles, que generan un color diferente al que presentaba al inicio, por efecto batocrómico, al hidrolizarse (como el amarillo del p-nitrofenil fosfato con la fosfatasa alcalina), o precipitantes (como el precipitado púrpura violeta generado por el sustrato NBT/BCIP, tetrazolio nitroazul/5-bromo-4-cloro-3′-indolfosfato con la fosfatasa alcalina). Ambos tipos están disponibles comercialmente incluso en formato de pastilla.