Diccionario

1. Véanse impronta y huella. 2. Sello o señal oficial, reconocida internacionalmente, aplicada a un artículo reglamentado para avalar su estatus fitosanitario.

Signo o medio que distingue o sirve para distinguir en el mercado entre productos o servicios, como distintos productos químicos o estuches de diagnóstico.

Incorporación a una imagen o fotografía de un logotipo o texto que sirve para informar acerca de cualquier condición de identidad o restrictiva o del uso de la misma.

Elemento, isótopo o compuesto químico que, unido a una molécula, orgánulo, fragmento subcelular o célula, o incorporado a un compuesto químico, permite seguir su metabolismo, ruta patogénica o destino. Los marcadores pueden ser de tres clases: i) marcadores isotópicos, que pueden ser isótopos radiactivos o pesados; ii) inmunomarcadores, que pueden ser antígenos o anticuerpos; y iii) marcadores de color o fluorescencia.

Aquellos basados en la emisión de fluorescencia por proteínas fluorescentes (PF) utilizadas como marcadores delatores. Constituyen una herramienta imprescindible (véanse inmunofluorescencia y tecnología del ADN recombinante). Este tipo de marcadores ha revolucionado el marcaje celular ya que permiten detectar marcadores proteicos in vivo, en un entorno celular natural y sin previa manipulación del tejido, en contraposición con los marcadores enzimáticos. Posibilitan el análisis de procesos dinámicos subcelulares y la localización subcelular de proteínas de interés.

Proteína, polipéptido, ácido nucleico, oligonucleótido, etc., utilizado como material de referencia en técnicas analíticas como la electroforesis, la cromatografía de infiltración sobre gel, centrifugación en gradiente de densidad, etc. Hay muchos de ellos disponibles comercialmente que pueden ser únicos o constituidos por mezcla de proteínas, teñidas o no.

Secuencia de ADN localizable específicamente. Véase también gen marcador. También puede ser un gen que confiere resistencia a determinado antibiótico (frecuentemente ampicilina, kanamicina, estreptomicina o tetraciclina), que puede reconocerse y utilizarse para seleccionar células. Si se inserta en un huésped bacteriano utilizando como vector un plásmido apropiado, y el cultivo completo se dispone en placas con un medio sólido que contenga el antibiótico, solo sobrevivirán las células que posean el marcador genético. Dichas células presentarán también las otras características que se hallaban contenidas en las secuencias ligadas al gen marcador en el vector.

Isótopo radiactivo de uno de los elementos habitualmente presentes en los tejidos. Los más comunes son el tritio (3H), 14C, 35S y 32P. Se utilizan para elucidar rutas metabólicas complejas, obtener los balances de masa de cultivos celulares, seguir cinéticas enzimáticas o para determinar mecanismos de reacción.

Secuencias de ADN en las que un fragmento se repite de manera consecutiva. Se utilizan como marcadores moleculares en múltiples aplicaciones.

Análisis efectuado mediante diversos tipos de marcadores simultánea o secuencialmente para comparar genomas. Los tres tipos más utilizados son el análisis de fragmentos de restricción de longitud polimórfica (RFLP), la amplificación aleatoria de ADN polimórfico (RAPD) e isoenzimas. Se usan también un número variable de secuencias repetitivas asociadas en tándem (VNTRs), polimorfismo puntual o de un único nucleótido (SNP) o polimorfismo puntual y otros basados en genotipado por secuenciación.

Método de marcado de los ácidos nucleicos para su utilización como sonda no radiactiva. Se une a la sonda un grupo que no perjudique su capacidad de hibridarse con las secuencias complementarias. Tras la hibridación, el dúplex marcado por afinidad reacciona con una molécula señal que contiene un sitio de unión para el marcador. Como moléculas señal suelen utilizarse, entre otras, anticuerpos fluorescentes o conjugados con digoxigenina, enzimas que producen cambios de color, catalizadores quimioluminiscentes, y la proteína verde fluorescente (GFP).

Técnica utilizada para marcar sondas de ADN. Se construyen dos sondas diferentes que son complementarias a segmentos adyacentes de un gen. Cada sonda lleva consigo una parte de un sistema quimioluminiscente. Al unirse las dos sondas, hibridan en la misma región y emiten luz que se puede detectar mediante el uso de un fotomultiplicador.

1. Marcado de cultivos u organismos individuales con radiactividad al suministrarles sustratos que contengan elementos radiactivos específicos. Estos compuestos radiactivos se utilizan para seguir el destino metabólico de los átomos o moléculas implicados. 2. Síntesis de un compuesto químico en la que alguno o algunos de los átomos se sustituyen por isótopos radiactivos del mismo elemento con una elevada actividad específica.

1. Aquel con una localización conocida en el cromosoma y de expresión clara y discernible. Se utiliza para la detección de recombinaciones, la efectiva realización de cruzamientos, construcción de mapas, etc. 2. (reporter gene). Segmento de ADN que codifica un producto que habitualmente no se sintetiza en la planta. La mayoría de estos genes codifican enzimas de resistencia a antibióticos de procariotas o a determinados herbicidas y han sido modificados por técnicas moleculares para que se expresen constitutivamente en microorganismos o en plantas y así detectar las transformaciones obtenidas. Véase también marcador genético, según definición del Diccionario de Ciencias Hortícolas de la SECH. Sin: gen delator.

Sigla del inglés. En español, proteína verde fluorescente mejorada.

Sigla del inglés. En español, proteína fluorescente amarilla mejorada.

Cada una de las formas de una enzima que catalizan la misma reacción pero que difieren ligeramente en su composición aminoacídica o en su estructura, por lo que pueden separarse mediante electroforesis o cromatografía y pueden distinguirse por las variaciones en sus secuencias de aminoácidos y el ADN en el que estas se hallan codificadas. En algunos casos, aparentes isoenzimas pueden ser artefactos de las técnicas de separación, debido a la desnaturalización parcial de parte de la proteína o a la formación de complejos con moléculas cargadas, como fenoles, durante la extracción. Cualquier variación de la relación carga/masa producida por dichas causas generará falsos isoenzimas al aplicar técnicas electroforéticas.

1. Véase polimorfismo de la longitud de secuencias sencillas. Véase también marcadores microsatélites. 2. Secuencia corta de ADN, por lo general formada por uno a cuatro pares de bases (unidad de ADN), que se repite en tándem un número variable de veces en una molécula de ADN. 3. (microsatellite, simple sequence repeat SSR, short tandem repeat STR). Secuencias de ADN en las que un fragmento, cuyo tamaño varía desde dos hasta seis pares de bases, se repite de manera consecutiva. La variación en el número de repeticiones, y no la secuencia repetida, crea diferentes alelos. Generalmente se encuentran en zonas no codificantes del ADN. Son neutros, codominantes y poseen una alta tasa de mutación, lo que los hace muy polimórficos. Se utilizan como marcadores moleculares en numerosas aplicaciones en el campo de la genética, como pueden ser estudios de parentesco y de poblaciones, por su alta capacidad para generar una huella genética personal o perfil genético.

Proteína aislada originalmente a partir de la medusa Aequorea victoria. La proteína verde fluorescente nativa tiene un tamaño de 27 kDa (238 residuos de aminoácido), absorbe luz azul con un máximo a 395 nm y emite luz verde con un máximo a 510 nm, tanto en organismos bioluminiscentes como en estado puro en solución. A diferencia de otros marcadores fluorescentes no requiere sustratos exógenos para emitir fluorescencia. Por sus propiedades fluorescentes y su relativa estabilidad, se ha convertido en el marcador más utilizado para la detección de la expresión génica y especialmente para la localización subcelular de proteínas. Es in vitro una proteína muy estable y resistente a altas temperaturas (tm=70 °C), a pH alcalino, a detergentes, a disolventes orgánicos y a las proteasas más comunes, con excepción de la pronasa. Soporta tratamientos con glutaraldehido lo que permite su observación en muestras fijadas para estudios de microscopía. Su fluorescencia se pierde si la proteína es desnaturalizada tras tratamientos a temperatura muy elevada, a pH extremos o tratamientos con cloruro de guanidina, y puede ser recuperada parcialmente si la proteína se renaturaliza. Se trata de un marcador ideal tanto para visualizar microorganismos como para determinar expresión génica, localizar proteínas a nivel subcelular o aplicarla a estudios de supervivencia bacteriana o fúngica; sus ventajas como marcador en bacterias se resumen en: i) es fácil de detectar; ii) no precisa sustrato exógeno; iii) permite visualizar células individuales; iv) permite un sencillo procesado de las muestras incluso en muestras fijadas si es necesario; v) ofrece la posibilidad de observar bacterias en su entorno natural, sin destruirlo y en tiempo real; vi) permite analizar células vivas y discriminarlas; vii) se puede utilizar en combinación con otros fluorocromos; y viii) no suele plantear problemas de ruido de fondo por autofluorescencia de las bacterias. Ha facilitado enormemente el estudio de las interacciones planta-patógeno y se utiliza en multitud de especies fitopatógenas como un marcador para caracterizar el proceso completo de colonización, para estudiar el patrón espacial de expresión génica y de localización proteica en distintos agentes patógenos. Ha permitido un extraordinario progreso en el conocimiento de los aspectos celulares y moleculares de las interacciones patógeno-huésped o anfitrión. Además, los organismos transgénicos que expresan la proteína verde fluorescente pueden detectarse fácilmente en el interior de la planta sin ninguna intervención externa, proporcionando una valiosa información del desarrollo del patógeno dentro de la planta. Véase además proteínas fluorescentes, para variantes de GFP mejoradas. Los cambios de secuencia realizados en el gen de la proteína verde fluorescente (GFP) han dado lugar a numerosas variantes de excitación y de emisión, disponibles comercialmente.

Denominación de una marca comercial de proteína verde fluorescente procedente de corales del género Zoanthus, familia Zoanthidae, que suponen una versión mejorada de la proteína verde fluorescente GFP convencional, frecuentemente utilizada.

Reproducción de la imagen de la sección de material vegetal que se ha aplicado sobre una materia blanda, porosa o dúctil, como la superficie de papel de filtro, membrana, gel o medio de cultivo solidificado con agar. Constituye un método de preparación de muestras para detección de patógenos sin realizar extractos, para su análisis serológico y por hibridación o amplificación molecular. También se utiliza para realizar aislamiento en medio de cultivo sólido mediante contacto ligero de la sección recién efectuada con la superficie del medio e incubación posterior. Véase también métodos directos de preparación de muestras. Sin: huella, marca.