Diccionario

Técnica de separación de moléculas cargadas basada en su diferente velocidad de migración sobre un soporte en función de la carga/masa y de su conformación molecular, cuando son sometidas a un campo eléctrico. Se utilizaba frecuentemente como método analítico y preparativo para la separación de macromoléculas (proteínas o ácidos nucleicos).

Técnica analítica rápida y eficaz de separación, apta para pequeños volúmenes, que se basa en la diferente velocidad de desplazamiento que tienen las distintas proteínas en el seno de un medio líquido, contenido en un tubo capilar, al someterlas a la acción de un campo eléctrico de alto voltaje (10-30 kvoltios, corrientes de 5-100 µA). La separación se lleva a cabo en un tubo de diámetro interno de 10-75 μm y una longitud de 20-100 cm, generalmente de sílice fundida, que se llena con el tampón que constituye el medio de separación a partir de los viales situados en los extremos del capilar. La muestra contenida en otro vial, se introduce por uno de los extremos del capilar reemplazando en el momento de la inyección uno de los viales de tampón por el vial de muestra. La monitorización de la separación se lleva a cabo colocando un detector en un punto del capilar de análisis situado generalmente antes del extremo de salida de este. Un ordenador se encarga del control de la instrumentación y de la adquisición y tratamiento de los datos suministrados por el detector. Se ha utilizado para la identificación y diferenciación de virus, como el de la tristeza de los cítricos (Closterovirus tristezae, Citrus tristeza virus-CTV), según su agresividad, combinada con polimorfismo de conformación de cadena simple (SSCP) y marcadores moleculares múltiples (MMM).

Electroforesis en gel en el que la dirección del campo eléctrico se cambia periódicamente. Esta técnica es similar a otros métodos electroforéticos habitualmente utilizados para separar moléculas de doble cadena del ADN que varían en tamaño hasta decenas de miles de pares de bases. Sin embargo, por la alternancia de la dirección del campo eléctrico, es capaz de separar fragmentos de ADN de varios millones de pares de bases de longitud. Se ha utilizado para el análisis comparativo de genomas bacterianos.

Aquella que utiliza agentes desnaturalizantes de proteínas, para hacer que pierdan su estructura tridimensional. Generalmente se utilizan agentes físicos (calor) o químicos como los detergentes (por ejemplo, dodecil sulfato sódico, sodium dodecyl sulfate, sigla SDS), caótropos (por ejemplo, urea) o agentes reductores (2-mercaptoetanol, ditiotreitol-DTT, entre otros) o cambios de pH o fuerza iónica. Para la visualización de las proteínas se utilizan diferentes métodos de tinción, siendo el más habitual el azul de coomassie. En la SDS-PAGE (véase electroforesis en gel de poliacrilamida), la separación es función del tamaño (masa molecular), lo que permite determinar el peso molecular de las proteínas. Para ello se compara la movilidad electroforética de la proteína de peso molecular desconocido (problema) con el de proteínas de referencia de peso molecular conocido.

Técnica de separación en la cual se utiliza un gel de agarosa como fase estacionaria. Es importante en la manipulación y secuenciación de genes, ya que separa moléculas de ADN en función de su peso molecular. Las bandas del gel se ponían de manifiesto con bromuro de etidio, pero debido a su toxicidad actualmente se usan diversos colorantes como RedSafe, SYBR® Green, GelRed™ o GelGreen™. Los dos últimos son tintes fluorescentes y ultra sensibles para ácidos nucleicos, muy estables y ambientalmente seguros y que pueden eliminados de forma segura por el desagüe o en basura regular, proporcionando seguridad y reduciendo el costo en la eliminación de desechos. El método en agarosa es medianamente sensible pues es capaz de detectar bandas con niveles de ADN del orden de 10-20 ng.

Procedimiento electroforético en el cual se utiliza la poliacrilamida como matriz de soporte para separar proteínas de acuerdo con la longitud de la cadena peptídica. Puede ser unidimensional utilizando tanto proteínas nativas (no desnaturalizadas) como proteínas solubilizadas (desnaturalizadas) con dodecil sulfato sódico (sodium dodecyl sulfate, SDS). La de tipo bidimensional, separa la proteína nativa en la primera dimensión. A continuación, la placa se trata con SDS y la muestra se separa en la segunda dimensión, en la que en realidad se separan las subunidades individuales de cada proteína. También se utiliza para el diagnóstico de viroides. Se basa en la separación diferencial de moléculas de ARN de las diferentes especies de viroides en función de su tamaño, lo que permite detectarlos e identificarlos. Como parte del diagnóstico de viroides se usa también el sistema de doble electroforesis secuencial en geles de poliacrilamida, que consiste en el uso de un primer gel nativo y un segundo gel en condiciones desnaturalizantes.

Molde que proporciona la forma y tamaño para que polimerice el gel. Tras la polimerización, se extrae y se sumerge en un tanque con tampón para que introducida la muestra migre electroforéticamente o corra dentro del gel.

Técnica alternativa a la PCR que aplica electroforesis capilar para determinar las longitudes de los amplicones, en lugar de la secuenciación del ADN como en el código de barras de ADN. Se obtiene un patrón de migración que permite la detección de varios picos característicos de muestras multiespecíficas.

Técnica mediante la cual se separan las biomoléculas en disolución cuando se ven sometidas a un campo eléctrico. Se trata de una técnica fundamentalmente analítica, aunque también se puede realizar con fines preparativos.

Medida de la capacidad de un material o sustancia para dejar pasar la corriente eléctrica a través de él. Depende de la estructura atómica y molecular del material, de otros factores físicos del propio material, y de la temperatura. La conductividad electrolítica en medios líquidos, muy utilizada en laboratorio para realizar electroforesis, está relacionada con la presencia de sales en disoluciones, cuya disociación genera iones positivos y negativos capaces de transportar la energía eléctrica al someterse el líquido a un campo eléctrico. A los conductores iónicos se les denomina electrolitos o conductores electrolíticos.

Aquel utilizado para realizar técnicas electroforéticas (tipo de cromatografía). Muy usual para separar virus, ácidos nucleicos, o proteínas de moléculas de diferentes tamaños al pasar a través de los poros de un gel de agarosa.

Procedimiento para caracterizar ácidos nucleicos (ADN, ARN) o proteínas mediante análisis electroforético o cromatográfico de fragmentos específicos.